Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
MMODOL --- Е-2-метил-6-метилен-4,7-октадиен-2-ол; DMODOL --- 3,7-диметил-1,6-окта-
диен-3-ол (линалоол).
указал на присутствие Z- и Е-вербенолов с их преимущественным содержанием у самцов. Питавшиеся самцы в отличие от самок производят также ипсдиенол. Был проведен анализ летучих веществ буровой муки (3 г), выделенных из воздуха над нагретой (кипящая водяная баня) буровой мукой, помещенной в колбу Эрленмейера (50 мл) и хранившейся до эксперимента при температуре сухого льда. Сравнительный ГЖХ-анализ на тех же двух колонках, полярной и неполярной, указал на присутствие большого количества терпенов, ипсдиенола и изомеров вербенола. Испытания в условиях леса показали, что привлечение особей этого вида увеличивается вдвое при добавлении к смеси ипсдиенола и Z-вербенола отрубка незаселенного дерева [405]. Позднее было обнаружено, что добавление к привлекающему веществу (S)-Z-вербенолу небольшого количества его энантиомера — (R)-Z-вербенола ингибирует привлечение [405].
Для извлечения агрегационного аттрактанта I. confusus отрубок, зараженный самцами, помещали в короб, через который прокачивали воздух со скоростью 2 л/мин. Летучие вещества конденсировали в ловушке, охлаждаемой льдом (—4°С), а затем в ловушке с сухим льдом — (60— 80) С. Конденсат экстрагировали петролейным эфиром и концентрировали при 80° С (не выше, так как при 85° активность концентрата уменьшается из-за разложения активных веществ) [379].
Для выделения летучих веществ из прямой кишки I. confusus препарировали по 35 жуков каждого пола. Жуки предварительно питались 48 ч при 28 С. Отпрепарированные прямые кишки помещали в замкнутый сосуд, который нагревали до 100° С и шприцем забирали воздух над ними. Воздушную пробу анализировали ГЖХ на неполярной (Апьезон L при 110°С) и полярной (DEGS при 95°С) колонках. Биотестирование на выходе из хроматографа (сплиттер) указало на присутствие активного вещества [404].
Чтобы буровая мука была пригодна для экстракции, ее необходимо сохранять влажной в холодном и темном месте под азотом. Для выделения
70
феромона I. confusus из буровой муки ее смешивают с четырехкратным (по весу) количеством бензола под азотом в течение двух часов при 50— 60° С, а затем образовавшуюся суспензию трехкратно впрыскивают с большой скоростью в растворитель для отделения частичек экскрементов от частиц непереваренного дерева. Сконцентрированный и высушенный экстракт, активный в количестве 3 X 10-8 г-эквивалента (г-экв.) буровой муки, перегоняют в аппарате, расстояние от перегонной колбы до приемника в котором не более 3 см, при 0,01 мм и 85—90°С в течение 1,5 ч. Вакуум снимают сухим азотом. Приемники, охлаждаемые в процессе перегонки сухим льдом с ацетоном, нагреваются до комнатной температуры. Дистиллят активен как 10-7 г-экв. буровой муки. После очистки дистиллята градиентным элюированием (бензол—серный эфир) через колонку с СГ была получена фракция, активная как 10“6 г-экв. буровой муки, и пригодная для ГЖХ выделения с неполярной (1 м X 0,9 см с 8% SE-30, 80° -> 4°/мин -> 200°) и полярной (2 м X 0,8 см с 3% Карбовакса 20М, 120°С) колонок в виде фракции, активной в количестве 5 X 10“5 г-экв. буровой муки [396]. В выделенной из буровой муки (3 кг от 21 тыс. самцов) ГЖХ-фракции содержались два вещества, которым по результатам анализа УФ-, ИК-, ЯМР- и МС приписаны структуры: (—)-2-метил-6-метилен-7-октен-4-ола (ипсенола) и Е-2-метил-6-метилен-4,7-октадиен-
2-ола [397]. После тщательного анализа экстракта буровой муки самцов I. confusus, кроме ипсенола, в нем оказались не одно, а два вещества, которым в результате спектральной идентификации была приписана структура Z-вербенола и 2-метил-6-метилен-2,7-октадиен-4-ола (ипсдиенола) 1351].
Для очистки дистиллята экстракта буровой муки использовали градиентное элюирование системой гексан-этиловый эфир, затем ацетоном и метанолом последовательно.
В результате анализа активной фракции и летучих веществ над самцами I. confusus ГЖХ на семи колонках в разной последовательности (1 — 1 м X 8 мм с 4% SE-30; 2 — 2 м X 6 мм с 4% Карбовакса 20М; 3 — 1,5 м X 2,4 мм с 4% ТСЕР; 4 — 3 м X 2,4 мм с 5% DEGS;
5—5% DEGS с добавлением 4% SE-30; 6 — 6,1 м X 2,4 мм с 5% OF-1 и 7 — колонка 3 с добавлением 4% SE-30) нашли в феромоне следующие вещества: ипсенол, ипсдиенол, Е-2-метил-6-метилен-4,7-октадиен-2-ол, Z-вербенол, Е-вербенол, вербеной и линалоол [398].
Составляя из найденных веществ смеси для биотестирования в лесу, обнаружили, что даже самая лучшая из смесей (ипсенол:ипсидиенол: Z-вербенол = 10 : 10 : 1) привлекает на порядок хуже, чем отрубок с заселенными самцами. Это заставляет предположить, что не все компоненты феромона I. confusus найдены [401 ].
Так как Z-вербенол и ипсдиенол одинаково усиливают активность ипсенола в привлечении короеда I. duplicatus, было высказано предположение
о возможном механизме энзиматического превращения ипсдиенола в Z-вербенол в клетках антенн насекомого [406].
При биоиспытаниях различных частей коры дерева-хозяина на I. дгап-dicollis обнаружено, что вещества, привлекающие самцов этого вида, содержатся только во флоэме [407]; самцы, питающиеся флоэмой, выделяют вещества, привлекающие особей обоего пола [408], а основной компонент феромона самца — ипсенол [403], являющийся (—) (S) -энантиоме-ром [410].
