Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
46
I______________________I-------------------——-J---- — ---------------1-----
о s to 15 *!UH
Puc. 2. Масс-фрагменте грамма частично очищенных экстрактов Lobesia botrana E7Z9DDDA
а — аликвота самки; б — аликвота самца; в — синтетический E7Z9DDDA разделившиеся изомеры; г — увеличенный масштаб 10 самок-эквивалентов; д — увеличенный масштаб E7Z9DDDA (колонка 50м х 0,3мм, баллистическая программа 2GPC-»170°, т/е 164, 23 эВ)
Использование масс-фрагментографии позволяет ограничиться двумя— пятью особями насекомых для идентификации компонентов их феромонов. Перед масс-фрагментографическим анализом необходимо иметь предварительное представление о структуре молекулы, которое может быть получено анализом экстракта методом сочетания ГЖХ с ЭАГ.
Например, ГЖХ—ЭАГ исследования модельных соединений и ГЖХ-фракций экстракта самок гроздевой листовертки L. botrana указали на возможное присутствие в экстракте E7Z9DDDA. Необходимо было убедиться в том, что активный в поле E7Z9DDDA действительно присутствует в экстракте самки L.botrana. Для этого снимают масс-фрагментограмму, фокусируя прибор на т/е 164 (М —60) при 23 эВ, частично очищенного экстракта одной самки-эквивалента и синтезированного эталона E7Z9DDDA. Как видно из рис. 2, фрагмент т/е 164 присутствует в экстрак-
47
те самки и отсутствует в экстракте самца. По времени удерживания он полностью совпадает с синтетическим образцом E7Z9DDDA. Фрагмент т/е 164, выбранный на грани компромисса между его специфичностью и интенсивностью, оказался удачным даже при снятии компонента в количестве 1,6 нг [267].
Для масс-фрагментографии основного компонента яблонной плодожорки в качестве опорного фрагмента лучше выбрать молекулярный ион (М+' 182), который всегда присутствует в масс-спектре молекул с двумя двойными связями, как это видно из масс-фрагментограммы компонентов феромона этого вида на рис. 3. Дифференциальный диагноз хроматограмм экстрактов самцов (а) и самок (б) L. pomonella в сравнении с хроматограммой синтетического E8E10DDDOL (в) указывает на его присутствие у самок (tft 16,45 мин) и отсутствие у самцов (рис. 3,/). Отсутствие E8E10DDDOL в экстракте самцов подтверждается масс-фрагмен-тограммой, как это видно на рис. 3 (//). Таким образом фрагмент с т/е 182 и временем удерживания 16,45 мин присутствует только в экстракте самки. Масс-фрагментография позволила определить присутствие E8E10DDDOL в количестве 3,5 нг.
Дифференциальная масс-фрагментография предполагаемых предшественников в экстрактах обоих видов насекомых показала, что у самок L. pomonella E8DDOL и EIODDOL присутствуют в количестве менее 0,1 нг, а у самок L. botrana предшественниками являются Z9DDA (составляет 0,2 нг), E7Z9DDDOL (присутствует в количестве 0,1 нг) [268].
К масс-фрагментографии обращаются в том случае, когда количество биоматериала ограничено или невозможно освободиться от сопутствующих балластных веществ. При этом можно провести масс-фрагментографию с выбором нескольких фрагментов. Например, для доказательства наличия в экстракте самки A. segetum Z5DA из масс-спектра синтетического образца Z5DA были выбраны 17 ионов, которые были обнаружены и в активной фракции после колоночной хроматографии экстракта кончиков брюшка самок A. segetum т/е:138 (Ci 0Н, 8 )137 110(С8Н14) 109 (С8 Н, 3 ) 96 (С7 Н , 2) 95 94 93 (С7Н9) 81 (С4Н9) 79 (С8Н7) 73 (СН.ОСОСНз) 67 (С,Н7) 66 (С5И6( 6561 (СН3СООН2Г 60 (СНзСООН) [98].
Окончательное доказательство структуры Z7DDA в феромоне Amathes C-nigrum было проведено масс-фрагментографией по ионам т/е : 31 (СН2ОН) 43 (СН3СО) 61 (СН3СООН2)+ [140].
Для идентификации Z11HDA в феромоне М. brassicae масс-фрагментографией были выбраны ионы т/е: 43(СН3СО) 61 (СН3СООН2)+ 152 (С,, Н 2 о) 194 (С|4Н26) 222 (С16Н30) [269].
При идентификации феромона Е. ochrogaster, состоящего из шести компонентов (DA DDA E5DDA Z5DDA Z7DDA Z9DDA), была использована масс-фрагментография по ионам: для спиртов — ЭУ М — 18; ХИ М + 1 (М + 1) - 18; для альдегидов - ЭУ М-18 М-1; ХИ М+1 М-1 (М + + 1) —18; для ацетатов - ЭУ М-60,61; ХИ М+1 (М+1)-60 [12].
Для идентификации в экстракте феромона самки Homeosoma electellum TDOL, Z9TDOL, Z9E12TDDOL использовали фрагменты т/е: 215 213 197 195; 213 211 195 193; 211 209 193 191 соответственно [119].
Впервые масс-фрагментография была удачно использована при идентификации неразделившихся ГЖХ-пиков составных частей феромона листовертки A. semiferanus. Из предварительных исследований феромона самок микроаналитическими методами было сделано заключение о наличии в феромоне См-ацетатов [170]. Испытание серии тетрадеценилацетатов указало на то, что одним из компонентов может быть Z10TDA [270]. Однако некоторые другие тетрадеценилацетаты тоже были привлекательны
48
Рис. 3. Хроматограмма (/) и масс-фрагментограмма (т/е 182) (//) экстрактов яблонной плодожорки Laspeyresia pomonella
I: а — фракция пяти самок-эквивалентов в эфире; б — фракция пяти самцов-эквивалентов в эфире; в — синтетический E8EIODDDOL. II: а — фракция двух самок-эквивалентов в эфире; б — фракция двух самцов-эквивалентов в эфире; в — синтетический E8E1QDDDOL в эфире
