Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
Химические реакции можно проводить перед ГЖХ или прямо в тонком слое с последующим биотестированием. Для этого, например, проба, нанесенная на пластинку в виде пятна, опрыскивается подходящим химическим реагентом, и после завершения реакции пластинка элюируется; часть пластинки, в которой ожидается присутствие непрореагировавшего феромона, вычищается, смывается и биотестируется. Если смыв неактивен, реакция прошла и предполагаемая функциональная группа в феро
31
Таблица 2
Результаты химического и биологического тестирования экстракта феромона
Химический тест Число прилетевших Результаты
самцов
Оэонолиз 0 Есть двойная связь
Г идрогенизация 0 То же
Бромирование 0 "
LiAIH„ 0 Есть карбонил
NaBH4 27 Нет кетонаили аль
дегида
2,4-ДНФГ 38 То же
Хлорная кислота 29 Нет эпоксида
Соляная кислота 23 Нет амина
Этврификация продукта 53 Есть ацетат
гидропиза ацетил хлоридом
моне присутствует. Такого типа реакции можно проводить в сочетании с любыми методами хроматографии [224]. Так, например, заключение о том, что феромон A. semiferanus является ацетатом ненасыщенного спирта, было сделано на основании химических реакций и полевых испытаний получившихся продуктов, как это можно видеть из результатов табл. 2 [107].
Таблица 3
Функциональные группы по биотесту и их ожидаемые предшественники
Функциональная группа Возможные предшественники
Эпоксид Олефин
Сложный эфир Спирт, фенол, карбоновая кислота
Спирт Сложный эфир, карбоновая кислота.
альдегид, кетон
Карбоновая кислота Сложный эфир, спирт, соль
Альдегид Спирт, карбоновая кислота
Кетон Спирт
Амин Амид, соль
Если функциональная группа в активном соединении определена, нетрудно догадаться о природе предшественника этого компонента. В этом случае обработка предшественника подходящим реагентом дает возможность увеличить количество выделяемого феромона. Так, например, обнаружение эпоксидной группы у феромона непарного шелкопряда натолкнуло на мыспь об олефиновом предшественнике феромона, что было доказано. многократным увеличением активности при эпоксидировании сырого экстракта [199]. Идентификация предшественника при этом может оказаться значительно более простой, чем идентификация конечного продукта.
В табл. 3 представлены предшественники, которых можно ожидать при наличии тех или иных функциональных групп, полученных при хи-.мическом тестировании [224].
32
Омыление и ацилирование
Реакцию омыления используют для определения сложно-эфирной группы в интересующем соединении [10, 84, 95, 100, 104, 168, 225]. Исчезновение активности у раствора, содержащего феромон, подтверждает наличие такой группы, а возвращение активности при ацилировании [95, 104, 130, 168, 225] продукта омыления указывает на то, что сложно-эфирная группа — ацетат.
Для проведения реакции омыления к спиртовому раствору феромона (0,5 — 1,0 мл) добавляют несколько капель 2,5—5% C2H2ONa (или КОН в метаноле), нагревают 1 ч на водяной бане, добавляют воду и экстрагируют [84, 117]. Или, например, для проведения микроомыления в сосуд на 4 мл с активной фракцией добавляют 10 капель 10%-ного КОН в метаноле, закрывают сосуд завинчивающейся пробкой с тефлоновой подложкой и оставляют при 40—50° С на 1 ч. Затем добавляют 500 мкл воды и продукт экстрагируют 1 мл эфира, встряхивая сосуд, а эфирный слой вытягивая пипеткой (три экстракции). Объединенный экстракт сушат, фильтруют через MgS04, упаривают азотом и растворяют в сероуглероде [63].
Ацилирование проводят, добавляя раствор уксусного ангидрида или хлористого ацетила к исследуемому раствору; выдерживают при комнатной температуре от нескольких минут до нескольких часов. При использовании хлористого ацетила его избыток по окончании реакции удаляют азотом; в случае ацилирования уксусным ангидридом реакционную массу обрабатывают водой и экстрагируют эфиром. Эфирный раствор промывают 50%-ным раствором NaHC03, водой, сушат и биотестируют [28, 55, 84]. Иногда ацилирование проводят в растворе пиридина [130, 172].
Биологическая активность экстракта D. castanea была нарушена его кипячением после упаривания растворителя с 5%-ным метанольным раствором C2H2ONa в течение 30 мин и восстановлена кипячением продукта метанолиза с изопропенилацетатом в 2%-ной толуолсульфокислоте [111]. К раствору, содержащему компоненты феромона совки A. ipsilon, добавляют несколько капель ацетилхлорида, выдерживают 10—15 мин при комнатной температуре и избыток вцетилхлорида удаляют потоком азота [84].
