Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
На двух препаративных колонках с разными фазами (15% ПЭГ-20М и 2% OV-1) последовательно были выделены компоненты феромонов A. breviplicanus [103] и A. velutinana [28]. Такая же техника сбора, последовательно с двух колонок (с фазой 3% OV-1,a затем с фазой 70% DEGS), была использована при выделении компонентов феромона A. semiferanus (E11TDA и Z11DTA) из экстракта, предварительно очищенного ТСХ [170]. Только одно ГЖХ-деление на колонке с ПЭГ 20М потребовалось для выделения Z9E12TDDA из фракции, очищенной ТСХ на аргентирован-ной пластинке [44]. Одной колонки с 3% PDEAS оказалось также достаточно для выделения компонентов феромона (Z11TDA и E11TDA) из фракции ТСХ воздушного экстракта самок A. velutinana [28], так же как одна колонка с 1,5% OV-17 была достаточна для обнаружения Z11HDAL и Z130DAL в ТСХ-фракции феромона С. suppressal is [19].
Использование ГЖХ в анализе феромонов. Для определения степени чистоты выделенных компонентов феромона, а также для их предварительной идентификации используют ПКХ на аналитических, чаще всего капиллярных, колонках. Уже при препаративном выделении активной фракции ее tR несет информацию о природе входящих в ее состав компонентов. Однако гораздо ббльшую информацию о характере этих веществ можно получить, применяя эталонные вещества в аналитической ГЖХ
28
на колонках разной полярности [67, 137, 155]. Для этой цели используют до семи колонок [143, 157, 183, 197, 206, 212, 222]. Так, с помощью пяти колонок различной полярности (Апиезон L — неполярная, SF-96 — полярная, NPGA — среднеполярная, Карбовакс 20М — очень полярная, QF-1 — полярная) был идентифицирован феромон P. gossypiella [137]. Использование трех колонок с разными фазами (12% DEGS — среднеполярная, на Анахроме ABS, 60—70 меш; DC-200 — неполярная, на Газ-хроме Q, 100/200 меш; 10% Апиезона L, на Анахроме ABS, 60/70 меш) позволило установить, что в основном компоненте Alabama argillacea содержится 20 атомов углерода [104].
Последовательно на трех колонках (15% ПЭГ-20М — очень полярная, 2% OV-1 — неполярная и 3% XF-1150 — полярная) были идентифицированы компоненты феромона A. velutinana [28] и A. breviplicanus [103]. Компонент феромона A. velutinana — Z11TDA был также идентифицирован на колонке с 10% JXR (диметилсиликон, неполярная) сравнением его времени удерживания со временем удерживания TDA [6]. Для определения двух компонентов (Z11HDAL и Z11HDOL) в феромоне С. topiara использовали две колонки: 2,3 мм X 7,3 м с Карбоваксом 20М и 2,3 мм X Х6,1 м с 15% OV-275 [58].
Впервые ГЖХ анализ сырого экстракта желез был проведен в 1973 г. у пяти видов насекомых (Т. ni, S. cerealella, Cadra cautella, P. interpunctel-la, Pseudoplusia includens). Железы самок помещали в 200 мкл эфира на 1—2 сек, смывки сушили MgS04, фильтровали, переносили в пробирку с суженным дном и упаривали под сухим азотом до 3—5 мкл. ГЖХ анализ всего лишь на одной колонке (1,8 м Х2 мм) с 3% OV-1 на Газхроме Q, при программировании температуры 100 (3,3 мин) -*¦ 10 /мин -*¦ 175
показал присутствие в экстрактах различных С12 — С16 спиртов и их ацетатов с большим количеством основного компонента в экстракте каждого вида [163].
Для идентификации второго компонента феромона Т. ni использовали ГЖХ анализ на шести различных колонках экстракта желез, очищенного ТСХ. Для этой цели экстракт 2000 желез самок в 50 мл сероуглерода делили препаративно на пластинках с Адсорбосилом, элюируя смесью эфир — гексан (10 : 90). Пятно с Rf 0,55 (обнаружено проявлением J2) было проэкстрагировано и проанализировано на колонках — 65 см X 4 мм с 2% Апиезона L или SF-96, 65 см X 3 мм С 5% Карбовакса 20М и DEGS, 69 см X 4 мм с 5% Silar-ЮС и 65 см X 3 мм с 5% OV-275 — с использованием в качестве внутреннего стандарта Z7DDA. Неизвестный пик, выходящий из хроматографа перед Z7DDA на Карбоваксе 20М и после него на Апиезоне L, по совпадал с DDA [67].
Определение индексов Ковача для неизвестных соединений в составе феромона в сравнении с индексами Ковача известных непредельных соединений на колонках с различными фазами позволяет установить положение двойной связи в соединении [16, 20, 104, 119, 208]. Например, индексы Ковача на двух колонках (с OV-1 и с DEGS) Z2TDA, Z5TDA, Z7TDA и Z11TDA оказались достаточно сильно различающимися (они увеличивались при удалении двойной связи от ацетатной группы) и помогли определить эти положения в компонентах феромона А. огапа [20].
Особое место в аналитической ГЖХ занимает использование различных капиллярных колонок, которое позволяет сразу решать вопросы, связанные с размерами молекул, положением двойных связей в них и их геометрической конфигурацией. Для этих целей используют два типа капилярных колонок: SCOT — набивные колонки [53, 64, 111, 142, 154, 185] и WCOT — обыкновенные капиллярные колонки с нанесенной фа-
29
зой [9, 74, 103, 109, 117, 132, 147]. Использование капиллярных колонок позволяет сократить время не только за счет сокращения количества используемых колонок, но и за счет упрощения определения микроприме-сей в активных фракциях феромонов. В ряде случаев использование капиллярных колонок позволяет идентифицировать наряду с основными и минорные компоненты феромона.
