Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
26
Очистка сырого экстракта, полученного экстракцией кончиков брюшка органическим растворителем, с помощью ГЖХ используется крайне редко. В этом случае поиск условий ГЖХ — разделения начинается с использования колонки средней полярности, а затем подбирают полярную или наоборот неполярную колонку [209].
При выделении компонентов феромона практикуется чередование колонок с фазами различной полярности. Это позволяет, выделив, например, на одной колонке компоненты с одинаковым углеродным скелетом, на другой поделить изомеры положения, а применив третью колонку, поделить пространственные изомеры. Так, при выделении феромона С. topiara использовали колонку (2,3 мм х 2м) с неполярной фазой [3% SE-30 на Газхроме Q (80—100 меш), 170°С]. Феромон собирали в капиллярные трубочки, охлаждаемые смесью ацетона с сухим льдом. Эффективность сбора при этом составляла 40—70%. Следующее разделение ГЖХ проводили последовательно на колонках: 2,3 мм х 2 м с очень полярной фазой (5% Карбовакса 20М на Газхроме О),2,3 мм х 6,1 м с фазовой, делящей Z- и Е-изомеры [15%,;0\Л275> на Хромосорбе Р (100—120 меш)], и 2,3 мм х х 7,3 м с очень полярной фазой (Карбовакс 20М) [58].
Для разделения пространственных изомеров, кроме фазы OV-275, применяют и другие (PDEAS, FFAP, CHDMS, XF-1150), использование которых одновременно дает возможность установить пространственное строение интересующей молекулы в сравнении с эталонными веществами [27, 28, 35, 53, 57, 103, 105, 109, 115, 196, 219, 211]. Только в единичных случаях при очистке сырого экстракта удается ограничиться двумя—тремя колонками. Это возможно тогда, когда компоненты феромона близки по структуре. Например, при выделении феромона С. rosaceana были отделены тетрадеценолы от их ацетатов на неполярной колонке (1,8 м х 2 мм) [3% OV-1' на Газхроме Q (100—120 меш), 190°С], а их пространственные изомеры были поделены на полярной колонке (1,8 м х 4 мм) (10% XF-1150 на Хромосорбе W-AW, 170°С). При этом тетрадеценолы были собраны в количестве 98,1% (Z11TDOL) и 1,9% (Е11TDOL), их ацетаты в количестве 98,3% (Z11TDA) и 1,7% (E11TDA) [219]. Или, выделение таких же двух компонентов (Z11TDOL и Z11TDA) феромона A. rosana осуществлено на трех колонках последовательно: с 3% OV-1, с 10% XF-1150 на Газхроме Q и с 3% PDEAS на Хромосорбе W-A-W-DMCS [115].
Для сбора фракций ГЖХ сырого экстракта Sperchia intractana (60 кончиков брюшка самок в 1 мл хлористого метилена) с колонки (2 м х х 2 мм), заполненной 3% 0V-1 на Хромосорбе W-AW-DMCS (100— 120 меш), применили пипетку Пастера, охлажденную сухим льдом [158], а для выделения активной фракции сырого экстракта самок P. limitata использовали препаративную колонку (1,8 м х 4 мм) сЗ%, OV-1 на Газхроме Q (100—120 меш) при 178°С. При анализе этой фракции на аналитической колонке (3,6 х 2 мм) с 3% PDEAS на Хромосорбе W-AW {100— 120 меш) в ней были обнаружены Z9TDA и Z11TDA (Гд 12,9 мин) в соотношении 9:91 [16].
Удачный подбор колонок при выделении феромона из сырого экстракта Sparganothis sp. позволил выделить следующие компоненты феромона: TDOL, E11TDOL, Z11TDOL, TDA, E11TDA, Z11TDA [157]. Для этого были выбраны следующие колонки: (2 м х 2 мм) с фазой 3% OV-1 на Газхроме Q (100—120 меш) при 160°С, с фазой 3% CHDMS при 190°С и 10%XF-1150Ha Хромосорбе W-AW-DMCS при 150°С [63].
Сырой экстракт кончиков брюшка A. rosana делили на колонке (1,8 м х х 4 мм) с 3% OV-1' при 165° С с последующим препаративным делением изомеров на колонке с 10% XF-1150 [115]. Две колонка с различными фа-
27
зами (5% 0V-1 и 5% DEGS) использовали для последовательного разделения двух компонентов феромона P. eridania [46].
Препаративное деление с помощью ГЖХ значительно упрощается, если нужно поделить экстракты, полученные из воздуха над насекомыми, из желез или яйцекладов насекомых. Так, например, воздушный экстракт феромона С. topiara делили последовательно только на двух препаративных колонках (2 м х 2,3 мм) с фазами 3% SE-30 и 5% Карбовакса 20М. Это деление позволило извлечь из феромона такие два его компонента, как Z11HDAL и Z11HDOL [58]. Для определения количественного состава компонентов в экстракте, полученном из воздуха над живыми самками совки Т. ni, и в железах насекомых этого вида использовали внутренний стандарт (1 мкг E9TDA) и препаративную ГЖХ на колонках: 115 см х х 3 мм с 5% Карбовакса 20М и 165 см х 3 мм с 1% Апиезона L [68].
Препаративное выделение компонентов феромона из экстракта желез A. transitella, проведенное с использованием колонки 1,8 м X 2 мм с 3% 0V-1 и колонки того же размера с 5% Карбовакса 20 М, позволило обнаружить Z11Z13HDDAL [130].
Однако преимущественно препаративная ГЖХ используется как последняя стадия очистки экстракта, обработанного колоночной или тонкослойной хроматографией. При этом нельзя забывать о возможной потере активности при расчленении феромонной смеси на индивидуальные компоненты, как это, например, наблюдалось при ГЖХ —.разделение активной фракции феромона P. xylostella [120, 183]. Для очистки фракции, полученной ТСХ или колоночной хроматографией экстракта, достаточно применить разделение только на двух колонках. Например, активную фракцию после колоночной хроматографии экстракта самок N. cytherea cytherea делили препаративно на двух ГЖХ-колонках различной полярности последовательно. На полярной колонке (55 см X 0,35 см) с 2,5% FFAP на Хро-мосорбе W-AW-DMCS сбор проводили при программировании температуры 60° (20 мин) ->¦ 1,5°/мин -*¦ 145°. Только одна из четырех фракций была активна. Ее препаративное разделение на неполярной колонке (55 см X X 0,35 см) с 4% OV-25 на Хромосорбе W-AW-DMCS позволило получить активную фракцию в количестве 10 нг/особь с временем удерживания (<я), близким к tR метилтетрадеканоата [34].
