Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
Сырой экстракт кончиков брюшка Q. nubilallis, был неоднократно поделен на колонке из нержавеющей стали (30 см х 7 мм), заполненной Стирагелем (100-А нм), при применении рефрактометрического детектора
1 и хлороформа в качестве элюента, продавливаемого через колонку со скоростью 1,5 мл/мин. Активность была сосредоточена во фракции, выходя-
23
щей в объеме 22,6—24,2 мл и, судя по объему, с которым вымывается эталон, содержала ацетатные эфиры с цепочкой С] 4. Дополнительная очистка этой фракции на колонке из нержавеющей стали (30 см х 4 мм), упакованной Поразилом, при элюировании смесью гексан — эфир (80 : 1) со скоростью 1,5 мл/мин позволила выделить активную фракцию в объеме 16,5—18,6 мл, пригодную для очистки микропрепаративной ГЖХ [64]. Жидкостная хроматография под давлением с обращенной фазой, использующая полярную подвижную фазу, содержащую AgN03, позволила разделить геометрические изс'леры моно-, ди- и полиненасыщенных соединений из класса ацетатов, спиртов, альдегидов с разной длиной цепи и разным положением двойственной связи в молекуле [214]. Например, с помощью жидкостной хроматографии с обращенной фазой были успешно разделены Z- и Е-изомеры 5DDA, 7TDA to 9TDA [215].
Тонкослойная хроматография
После того как основная масса посторонних примесей удалена из экстракта, дальнейшая очистка феромона может быть проведена тонкослойной хроматографией (ТСХ). ТСХ является доступным, простым и дешевым методом очистки и частичной идентификации феромонов насекомых. Добавление к адсорбенту небольшого количества AgN03 позволяет разделить компоненты на предельные и непредельные и пространственные изомеры между собой. Однако рассматривая ТСХ как метод препаративного разделения, необходимо учитывать летучесть феромонов и нестабильность, связанную с возможностью их окисления кислородом воздуха. Это обстоятельство усложняет применение ТСХ, заставляя использовать этот метод в атмосфере инертного газа. Неудобно также и то, что ТСХ оперирует мик-рограммовыми количествами веществ [216].Тем не менее во многих работах, особенно японских и китайских исследователей, ТСХ [45, 74, 89, 11Q 116t 124,129,217] используется как метод препаративного выделе-
ния, так и метод предварительной идентификации компонентов феромона сравнением Rf эталона с Rf компонента феромона [197].
ТСХ применима в тех случаях, когда феромоны находятся в насекомом в достаточных количествах или когда возможно использовать экстракт от такого количества насекомых, чтобы можно было оперировать с микрограммами веществ. Так, для препаративного выделения компонентов феромона из экстракта одной тысячи самок D. castanea успешно применили ТСХ на силикагеле. Активная фракция вымывалась в пятно с /?у 0,4—0,5 при элюировании серным эфиром [111].
ТСХ как метод препаративного выделения компонентов феромона. Для целей препаративного выделения компонентов феромона используют ТСХ на силикагеле [49, 50, 123, 132] на пластинках с Адсорбосилом [67, 185], на Кизельгеле G [74], А1203 [100] или полностью ацетилированной целлюлозе, содержащей 10% CaS04 [5]. В качестве элюентов используют бензол [10, 28, 74, 86, 168] или смеси: бензол — петролейный эфир [6], бензол — гексан [91], бензол — этилацетат (110], гексан — хлористый метилен [107], гексан — этилметилкетон [109], гексан — эфир [185], петролейный эфир — серный эфир [55, 116]. Для проявления пятен применяют 2', 7* -дихлорфлуоресцеин в 95%-ном этаноле [74] или 2,4-динитрофенил-гидразин в горячей смеси метанол — серная кислота [55].
Особенно удачно использование ТСХ после гель-фильтрации. Так, фракцию, активную после гель-фильтрации на Сефадексе LH-20 экстракта P. interpunctella, можно разделить ТСХ на силикагеле, элюируя бензолом^
24
и выделить активную зону с Яу0,4 [218], а в системе бензол — гексан (1:1) выделить компоненты феромона Chi to suppressalis с Rf 0,4—0,5 (ZIIHDALn Z130DAL) [91].
Активный фильтрат после вымораживания активных фракций колоночной хроматографии экстракта S. frugiperda наносили в количестве 5 мкг на пластинку с силикагелем толщиной 250 мкм и элюировали смесью гексан — эфир — уксусная кислота (90:5:1) до высоты 10 см. УФ-проявление дало шесть флуоресцирующих пятен. Активность была сосредоточена в пятне с Rf 0,75 (Z9TDA). Крупное препаративное деление осуществили на пластинке слоем 600 мкм. Активное пятно было счищено в полумик-кросокслет и проэкстрагировано гексаном. В результате получили 100 мг активного неперегоняемого остатка [5]. Частично очищенный экстракт этого же вида делили ТСХ на пластинке с толщиной слря 300 мкм полностью ацетилированной целлюлозы с 10% CaS04, элюируя смесью метанол — вода (8:1) на высоту 10 см. Активность была в пятне с /7^0,65 (Z9TDA) [5]. В системе гексан - этилметилкетон (80:20) были выделены бомбикол (/?f0,53) и бомбикаль (Я^-0,29), компоненты феромона
В. mori [109]. У A. semiferanus компоненты феромона были обнаружены в пятне с Rf 0,5, что по анализу ГЖХ соответствовало E11TDA и Z11TDA [170].
Как окончательная стадия очистки феромона Argyroploce schistaceana ТСХ на силикагеле была использована для выделения 9DDA в системе петролейный эфир — серный эфир (95:5 или 70:30) [116].
