Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лебедева К.В. -> "Феромоны насекомых" -> 13

Феромоны насекомых - Лебедева К.В.

Лебедева К.В., Миняйло В.А., Пятнова Ю.Б. Феромоны насекомых — М.: Наука, 1984. — 269 c.
Скачать (прямая ссылка): feromoninasekomih1984.djv
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 150 >> Следующая

Высокоэффективная жидкостная хроматография. Главным достоинством высокоразрешающей жидкостной хроматографии под давлением является быстрота процесса очистки (несколько минут вместо нескольких недель), а слабое место этого метода — в недостаточно высокой чувствительности применяемых детекторов (рефрактометрического, УФ и с переменной длиной волны). Как правило, феромон не может быть детектирован с помощью этих детекторов, но могут быть детектированы сопутствующие ему вещества, которых всегда много в биоматериале и которые могут служить маркерами феромона. Тем не менее удобство оперирования, высокая скорость и высокая разрешающая способность ставят ее в один ряд с ГЖХ, оставляя за собой (в сравнении с ГЖХ) такое преимущество, как оперирование при комнатной температуре.
высокоэффективная жидкостная хроматография, использующая силикагель с AgN03, способна достаточно быстро разделять геометрические изомеры [210]. Наибольшее развитие в применении к очистке феромонов техника скоростной жидкостной хроматографии получила в исследованиях Тамлинсона, который использовал для этой цели три типа колонок с целью последовательного выделения феромона из сырого экстракта насекомых [211].
Первый тип колонок предназначен для выделения феромона из экстракта эксклюзионной, или как ее еще называют, гепь-проникающей хроматографией. Например, стеклянная колонка (внутр. d = 1,27 см), упакованная на высоту 90 см гексановой пульпой Порагеля 60А (37—75 нм), элюируется гексаном со скоростью 300 мл/ч под давлением 2,8 кг/см2. Проба в 0,5 мл концентрированного раствора загружается в эту колонку и для полного ее разделения требуется всего 1 ч. Все соединения с молекуляр^ ным весом более 2000 не проникают в поры и вымываются из колонку без задержки. Меньшие молекулы, проникшие внутрь рабочего пространст|-
22
ва носителя, разделяются в порядке, обратном размерам их молекул. Активные вещества выходят с такой колонки практически в одной фракции, вполне пригодной для ГЖХ-анализа. Так, на колонке с Порагель 60А при элюировании гексаном был успешно поделен сырой экстракт Н. virescens [164], а экстракт кончиков брюшка трех тысяч самок
A. ipsilon очищали на колонке (2,5 см х 1,3 см) со Стирагелем (10—50 нм) при элюировании бензолом [84]. Адсорбенты, применяемые в эксклюзион-ной хроматографии, устроены на одинаковом принципе, хотя и имеют разные фирменные названия. Деление экстракта желез Amyetois transitella на колонке из стекла (1 см х 50 см) с Порагелем 60А при элюировании гексаном (120 мл/ч) позволило сразу его идентифицировать ГЖХ—МС [130]. Так, сырой экстракт 1000 самок феромона P. operculella поделили на стальной колонке (2м х 6 мм), упакованной Bio-Beads SX-2 при элюировании бенксеном со скоростью 1 мл/мин [212]. В таких же условиях была выделена ЭАГ-активная фракция экстракта О. nub i la I is, вымывавшаяся в 78—80 мл растворителя (бензола) со скоростью 1,0 мл/мин, с колонки (1,5 м х 12 мм), заполненной Bio-Beads SX-2 [35]. В аналогичных условиях было проведено отделение ЭАГ-активной фракции от высокомолекулярных веществ экстракта A. polyphemus и выделение ее в виде, удобном для очистки ГЖХ [168].
Второй удобной для скоростной жидкостной хроматографии колонкой считается стальная колонка (0,6 см х 50 см), упакованная Лихросорбом и пригодная как для градиентного элюирования, так и для изократного элюирования. С помощью такой колонки 3%-ным эфиром в гексане были разделены пространственные изомеры Z3E5TDDA и E3E5TDDA, входящие в состав феромона Prionoxystus robiniae [65]. Ацетатную фракцию воздушного экстракта феромона A. ipsilon элюировали 1%-ным этилацетатом в гептане за 6—7 мин с колонки из нержавеющей стали (2мм х 500 мм), заполненной Лихросорбом (10 нм перед анализом ГЖХ [84]).
Эфирный экстракт полового феромона девственных самок A. fasciata подвергался высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке (1 м х 8 мм), заполненной Shodex GPC, а после очистки активной фракции на флоризиле и ТСХ с AgN03 очищался на колонке (0,25 м х 2,1 мм), заполненной Силикапаком НР-250 при элюировании в первом случае хлороформом со скоростью 1 мл/мин, а во втором случае — 0,5%-ным эфиром в гексане со скоростью 0,6 мл/мин [74].
И наконец, самой полезной колонкой в жидкостной хроматографии под давлением представляется стальная колонка (1,27 см х 60 см), упакованная Адсорбосилом 2-ADN, силикагельная колонка с 20% АдГЮз, элюируемая, как правило, бензолом. Эта колонка пригодна для быстрого разделения широкого круга органических соединений и может быть использована неограниченно. Размеры частиц Адсорбосила колеблются от двух до 11 мкм. На этой колонке был отделен синтезированный E3Z130DDAOT содержащегося в нем в количестве 3—5% Z3Z130DDA. При скорости бензола 6,5 мл/мин Е, Z-изомер элюировался между 10 и 14 мин, a Z, Z-изо-мер — между 21 и 27 мин. Скорость элюента в колонке при этом была 4 мл/мин [211]. При использовании такой же колонки была выделена фракция экстракта Н. armigera, пригодная для идентификации ГЖХ — МС и оказавшаяся индивидуальным веществом Z11HDAL [17].
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 150 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed