Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
Иногда стимуляция антенны производится продуванием воздуха в течение определенного времени (около секунды) через трубку, где находится источник феромона [195].В этом случае в ЭАГ имеется максимально возможная составляющая от действия толчка самого воздуха.
226
Наиболее распространен способ, при котором из трубки на антенну постоянно подается поток воздуха. Феромон вводится в этот поток в виде паров через боковое отверстие в подающей воздух трубке. Подача обычно осуществляется кратковременным толчком воздуха с помощью шприца через трубку с испарителем феромона [7, 214]. В этом случае действие самого толчка воздуха выражено несколько меньше. Наиболее совершенные системы подачи предусматривают плавную, но достаточно быструю замену чистого воздуха воздухом, несущим феромон, и наоборот [41, 139]. В этом случае удается снизить до минимума влияние на ЭАГ раздражения воздухом. Предложены и более сложные системы подачи раздражителя на антенну, обеспечивающие замещение, разбавление и смешивание нескольких раздражителей [41]. Такие системы нужны, например, для изучения селективной адаптации и для других исследований.
Скорость воздуха, поступающего на антенну, устанавливают обычно в пределах от нескольких десятков сантиметров в секунду до 1—2 м/с. Диаметр подающей трубки выбирают от долей миллиметра до сантиметра. Выходное отверстие трубки располагают на расстоянии 2—5 см от антенны, ориентируя ось трубки в середину антенны. Для массовых тестов трубки малого диаметра не совсем удобны, так как трудно добиться точного попадания струи на антенну.
Конкретные параметры одной из наиболее простых и удобных систем подачи воздуха таковы [7]. Воздух со скоростью около 1 м/с подается через трубку диаметром 1 см на антенну, помещенную в 2—3 см от конца трубки. Пары феромона вводятся в этот поток воздуха через отверстие диаметром 0,5 см, расположенное на расстоянии 2,5 см от конца трубки продуванием 1 см воздуха с помощью шприца через капилляр с адсорбированным на его стенках феромоном, или пипетку, где находится кусочек фильтровальной бумаги с образцом феромона.
На амплитуду и форму ЭАГ влияют многие особенности системы подачи раздражителя: скорость воздуха, взаимное расположение антенны и подающей трубки, длительность подачи раздражителя и др. [7, 37, 83]. Аппаратура для регистрации ЭАГ нестандартизована и поэтому сравнивать абсолютные величины ЭАГ, полученные разными исследователями, обычно нельзя.
Для корректировки ответов с учетом работоспособности антенны, снижающейся во время опыта, на нее периодически подают контрольный раздражитель. Корректировку амплитуды ЭАГ проводят по формуле:
К0ХЫ
Х‘0 „
где Xio и Xin — соответственно скорректированный и нескорректированный ответы на раздражитель /; К0 и Кп — ответы на контрольный раздражитель в начале опыта и в момент п регистрации ответа Xin (определяется со вспомогательного графика) [214] или непосредственно до или после этого.
Возможности и ограничения метода ЭАГ и других злектрофизиологических методов
Простота аппаратуры, высокая чувствительность (нанограммы и пикограммы на источнике феромона), простота подготовки и проведения тестов, быстрота их выполнения (за час можно испытать десятки веществ), возможность обойтись для испытания небольшим количеством насекомых (единицами или десятками), высокая воспроизводимость результатов.
227
малое влияние состояния насекомых и внешних факторов по сравнению с поведенческими тестами [7] - это те достоинства метода ЭАГ, которые обеспечили его широкое применение.
Основное применение метод ЭАГ находит при идентификации феромонов. Антенна используется как детектор компонентов феромонов при разделении феромонов различными хроматографическими методами, особенно при газовой хроматографии. При установке делителя потока на выходе колонки может производиться параллельная запись детектором хроматографа и ЭАГ-детектором [6, 175]. Однако чаще собирают одноминутные фракции с выхода колонки в капилляры и затем тестируют их [7]. При зтом обнаруживаются основные ЭАГ-активные компоненты феромонов. Обнаружение минорных компонентов не всегда возможно или затруднено, так как они могут содержаться в незначительном количестве и вызывать малую ЭАГ или могут не вызывать ЭАГ-ответа вовсе. Иногда для поиска некоторых веществ в феромонах используют антенны других видов, обладающих заведомо высокой чувствительностью к этим веществам [152]. Достоинство ЭАГ-метода по сравнению с поведенческими методами тестирования — обнаружение тех компонентов, которые по отдельности не вызывают поведенческого ответа. При биотесте из осевшего в капилляре вещества расходуется очень малая часть, и после теста вещество может быть фымыто из капилляра и использовано для дальнейшей работы.
Метод ЭАГ применяется также для контроля результатов разных химических реакций, проводимых с микроколичествами феромона (с целью определения функциональных групп и т.п.). Однако при зтом следует помнить о множественности рецепторов. Активность может, например, сохраниться после омыления зфира, если на антенне есть рецептор для соответствующего спирта.
