Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лебедева К.В. -> "Феромоны насекомых" -> 122

Феромоны насекомых - Лебедева К.В.

Лебедева К.В., Миняйло В.А., Пятнова Ю.Б. Феромоны насекомых — М.: Наука, 1984. — 269 c.
Скачать (прямая ссылка): feromoninasekomih1984.djv
Предыдущая << 1 .. 116 117 118 119 120 121 < 122 > 123 124 125 126 127 128 .. 150 >> Следующая

У антенны обычно отрезают несколько члеников на ее дистальном конце, чтобы обеспечить лучший контакт электрода с гемолимфой. Это делается с многочлениковыми антеннами, например, чешуекрылых. На таких антеннах хеморецепторные сенсиллы распределены на многих члениках флагел-лума, и потеря нескольких члеников мало сказывается на ЭАГ. Однако в целом распределение разных сенсилл на антенне может быть неравномерным. У таракана Periplaneta americana рецепторы феромона наиболее многочисленны в средней части антенны [218]. Неодинаково может быть число тех или иных сенсилл и с разных сторон одного членика, и для большей воспроизводимости результатов в некоторых случаях желательно помещать антенну к источнику раздражителя всегда определенной стороной [195]. Кончики антенн не обрезают, если антенны небольшого размера или имеют такую форму, что отрезание кончика может существенно повредить сенсорный аппарат (например, у короедов).
Электрический сигнал отводится через раствор соли, как указано выше. Обычно используют физиологический раствор для насекомых, например такого состава: NaCI — 7,5 г/л; СаС1г — 0,21 г/л; KCI — 0,35 г/л и NaHC03 -0,2 г/л [7], но состав не очень критичен.
Если работают с живыми насекомыми, то один электрод в виде пипетки может быть присоединен к отрезанному концу антенны. Другой электрод обычно вводят через межсегментную мембрану между скапу-сом и педицеллусом или другими члениками вблизи основания антенны. При введении этого электрода в голову иногда могут регистрироваться потенциалы мышц, очевидно педицеллуса [5, 219]. Для отведения ЭАГ, особенно от мелких насекомых, иногда используют в качестве обоих электродов микрокапилляры (стеклянные микроэлектроды). У крупных бабочек сатурний ЭАГ регистрировали, подводя капиллярные электроды к боковым ветвям антенн у вершины ее и основания [195]. У короедов оказалось удобным подсоединять антенну к аппаратуре через агаровый мостик [220].
Сообщается, что ЭАГ можно регистрировать с помощью металлических (например, вольфрамовых) микрозлектродов [139] или отводить сигнал от жидкости, непосредственно контактирующей с антенной, через серебряную, платиновую или другую проволоку [132, 133, 137]. Однако во избежание поляризации, из-за которой постоянно смещается нулевая линия, усилительная аппаратура обычно соединяется с раствором и антен-
15. Зак. 1112 225
ной через хлорированную серебряную проволоку (Ag-AgCI-переход). Хлорирование производится пропусканием слабого тока через серебряную проволоку, погруженную в раствор NaCI, или погружением ее в расплав AgCI [7].
При использовайии отрезанных антенн подготовка препарата к работе занимает минуты. Подготовка к регистрации ЭАГ у живых насекомых требует больше времени, так как приходится закреплять насекомых и их антенны, а также вводить электроды с помощью Микроманипулятора под контролем бинокулярного микроскопа. Поэтому при рутинном использовании метода удобнее работать с отрезанными антеннами, если позволяет объект.
Регистрация ЭАГ. Препарат антенны, когда отведение производится без помощи микроэлектродов, имеет сравнительно небольшое сопротивление, скорость нарастания ЭАГ относительно невелика, амплитуда имеет значительную величину. Поэтому ЭАГ может регистрироваться сравнительно простой аппаратурой. В качестве предварительного усилителя может быть использован простой самодельный усилитель постоянного тока с входным сопротивлением в несколько десятков мОм и выше (например, [221]). Еще лучшие результаты могут быть получены при использовании в таком усилителе микросхемы — операционного усилителя с полевыми транзисторами на входе. Во входной цепи должен быть калибратор, его удобно включать в цепь индифферентного электрода последовательно — в этом случае он одновременно используется для контроля подключения антенны. Сигнал с предварительного усилителя может поступать на осциллограф и воспроизводиться на экране электроннолучевой трубки. Если усиление прокалибровано, амплитуду легко отсчитать непосредственно с экрана. Наиболее удобны осциллографы с запоминанием, но можно использовать и обычные осциллографы с трубкой с длительным послесвечением [7, 214]. Если необходимо, сигнал можно сфотографировать с экрана или записать с помощью самопишущего прибора (например, светолучевого осциллографа).
Поскольку для большинства биотестов важна только амплитуда ЭАГ, предложено простое устройство, позволяющее измерять амплитуду с помощью цифрового вольтметра. Оно объединяет предварительный усилитель и пиковый детектор [222].
Для устранения наводок из цепи переменного тока регистрацию ЭАГ выполняют в экранированной камере, но чаще экранируют только сам препарат антенны и входные цепи предварительного усилителя. Хорошую экранировку стеклянных пипеток-электродов обеспечивает обертывание их фольгой, присоединяемой к корпусу усилителя, в этом случае может не потребоваться никакая дополнительная экранировка [7].
Подача раздражителя. Для целей ЭАГ-тестирования на антенну должны поступать в течение определенного времени пары феромона заданной концентрации, при этом начало и конец подачи их должны быть четко фиксированы. Такая подача может быть осуществлена только с потоком какого-либо не вызывающего существенной ЭАГ-реакции газа. В качестве последнего обычно используют воздух, предварительно очищая его от загрязнений. Воздух вызывает ЭАГ небольшой амплитуды в момент попадания его струи на антенну или при изменении скорости струи. Эта ЭАГ, как полагают, обусловлена стимуляцией механорецепторов [204].
Предыдущая << 1 .. 116 117 118 119 120 121 < 122 > 123 124 125 126 127 128 .. 150 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed