Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лазуркина Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 65

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркина Ю.С.

Лазуркина Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — Наука, 1967. — 343 c.
Скачать (прямая ссылка): fizmetodiisledovaniyabelkov1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 59 60 61 62 63 64 < 65 > 66 67 68 69 70 71 .. 133 >> Следующая

а\ + а2 „ и 2ДЯ (а! - а2)
— И ол ----------------,
0 13
о о
находим окончательно
г 1 а»К
[а]?. =-----------1--------• (36)
Я2 - я30 а2 - Я3)2
Выражение (36) называется уравнением Моффита и играет важную роль в молекулярной биологии, поскольку дисперсия оптической активности полипептидов и белков, находящихся в спиральном состоянии, удовлетворяет ему в широкой области длин волн.
Поскольку Ьо пропорционально АХ, а для денатурированной структуры ДЛ = 0 (расщепление по частоте отсутствует), то &о=0 для клубка и отлично от нуля для спиральных участков, причем измеряемая величина Ь0 просто пропорциональна степени спиральности, т. е. доле вещества, находящегося в спиральных участках. Что касается коэффициента а0, то в него дают вклад как клубкообразная структура, так и спиральные участки и он, следовательно, должен быть линейной функцией от степени спиральности.
Три параметра, которые входят в уравнение (36), можно вычислить из кривой дисперсии оптической активности. Если отло-
V-K . к ,
жить значения [а]?.---------- в зависимости от
случае в этих координатах экспериментальные данные не лягут на прямую. Величина Ко подбирается таким образом, чтобы экспериментальные точки легли на прямую, уравнение которой запишется так:
г , А.*-*5 , Ь^1 /074
[ак---------= aQ Н-----------. (37)
Я2 — Я2
Из наклона прямой определяется Ь0, а из пересечения с осью ординат — а0. Измерения дисперсии оптической активности в спектральной области 300—600 ммк для спиральных полипептидов дали значения Я0=212 ммк. Однако при расширении измеряемой
области спектра до ~240 ммк оказалось, что Х0 для некоторых полипептидов отличается от 212 ммк [26].
Кополимер 5%-ного L-тирозина с L-глутаминовой кислотой в области спектра между 240 и 280 ммк вместо Я0 = 212 ммк дал величину Яо = 216 ммк (рис. 15) [26]. Следует отметить, что в
Рис. 15. Графическое представление уравнения Моффита при двух разных Яо для кополимера 5%
1-тирозина с 1-глутамииовой кислотой в области спектра от 240 до 700 ммк
1 — спиральная форма Хо = 216 ммк, 2 — то же,
А,о=212 ммк; 3 — клубкообразная форма Хо = 216 ммк;
4 — то же, Ко ~ 212 ммк
формуле Моффита коэффициент Ьо сильно зависит от выбора Ко [29]. Так, значения Ьо для кополимера 5%-ного L-тирозина с L-глутаминовой кислотой оказались соответственно равны — 615 и —535 при значениях Яо 212 и 216 ммк. Уравнение (36) следует рассматривать как эмпирическое с Яо == 212 ммк и Ьо = —630 для полностью сйиральных полипептидов.
Поскольку удельное вращение [а] и дисперсия оптической активности значительно изменяются при переходе спираль — клубок, эти данные можно использовать для определения степени спиральности белков и полипептидов.
Если принять, что данная макромолекула содержит только две структуры — спиральную и клубкообразную, то
[ah = (1-Ы [<*]? + /«[<*]". (38)
ГДе [а]° и [а]х —удельные вращения чисто клубкообразной и спиральной структур соответственно; /я—степень спиральности [30].
Как уже указывалось выше, в уравнении Моффита (36) коэффициент а0 есть линейная функция степени спиральности, а Ьо прямо пропорционально степени спиральности.
Степень спиральности можно определить тремя способами; по (а]л1 по а0 и по Ьо-
Однако определение степени спиральности макромолекул по [а] х и по а0 менее надежно, поскольку в эти величины дает вклад не только спиральная структура, но и отдельные асимметрические мономерные единицы (например аминокислоты), вращение которых очень сильно зависит от окружающей среды, в частности, от растворителя.
Значение степени спиральности, определенное по формуле
/я = —°'Hd6' , где Ь0,'наб определяется из уравнения (37) по дис-630
Персии оптической активности для данного белка или полипептида, хорошо совпало со степенью спиральности, определенной другими методами (методом дейтериевого обмена, методом гипо-хромного эффекта и др.).
Уравнение (36) прекрасно описывает дисперсию оптической активности спиральных полипептидов и фибриллярных белков. Однако и для глобулярных белков, чья дисперсия описывается одночленным уравнением Друде с Кс, изменяющимся от 210 до 280 ммк для разных белков, бывает очень полезно формально применить уравнение Моффита (36). Степень спиральности глобулярных белков, определенная таким образом, хорошо совпала с результатами, полученными другими методами.
Несмотря на значительные успехи, достигнутые в исследовании конформаций макромолекул методами оптической активности, есть вопросы, которые еще очень мало изучены. Среди них — вопрос о роли, которую играют другие вторичные и третичная структуры белков и полипептидов.
Предыдущая << 1 .. 59 60 61 62 63 64 < 65 > 66 67 68 69 70 71 .. 133 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed