Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лазуркина Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 38

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркина Ю.С.

Лазуркина Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — Наука, 1967. — 343 c.
Скачать (прямая ссылка): fizmetodiisledovaniyabelkov1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 32 33 34 35 36 37 < 38 > 39 40 41 42 43 44 .. 133 >> Следующая

Контрастирование уранилацетатом пока не дает сколько-нибудь ощутимых преимуществ по сравнению с оттенением в отношении выявления деталей строения. Никаких признаков упорядоченной внутренней структуры молекул на микрофотографиях наблюдать не удается. В одрой из работ [48], проведенной на очень высоком экспериментальном уровне, кроме уранилацетата использовали н другие окрашивающие нуклеиновую кислоту вещества. Однако и здесь получить какие-либо данные о вторичной структуре молекул не удалось.
Контрастирование молекул присоединением к ним ионов тяжелых металлов продолжает разрабатываться. В связи с этим интересны работы Бира с сотрудниками [50, 51, 59]. Ими разрешается задача еще более важная, чем исследование вторичной структуры молекул нуклеиновых кислот, а именно определение последовательности нуклеотидов, т. е. первичной структуры. До сих пор это делается химическими методами, причем исследователям приходится сталкиваться с большими трудностями. Поэтому значение работ группы Бира трудно преувеличить.
Интересно проследить этапы этих исследований. Прежде всего решалась проблема извлечения нз раствора и нанесения на подложку целой молекулы нуклеиновой кислоты. Это оказалось сделать сравнительно просто, применив описанные выше методы.
Контрастирование осуществлялось присоединением к молекуле ионов тяжелых металлов. Задача в данном случае осложнялась тем. что нужно было выявить нуклеотиды только определенного сорта, а не все. Поэтому метящие группы должны избирательно присоединяться к определенного вида нуклеотидам, обладающим достаточной рассеивающей способностью, чтобы их можно было различить при помощи электронного микроскопа. Вместе с тем размеры присоединяемой группы должны быть малы по сравнению с расстоянием между основаниями в нуклеотидах.
Как известно, молекула ДНК в подавляющем большинстве случаев представляет собой двойную спираль. Если даже представить себе гипотетический случай, когда соответствующие метящие группы найдены, их нзображення будут накладываться одно на другое. Поэтому исследовались не нативные молекулы, а одиночные полинуклеотндные цепочки. В этом случае расстояние между нуклеотидами будет выглядеть одинаковым и равным 6 А. Появилась реальная возможность увидеть группы тяжелых атомов, присоединенных к соседним нуклеотидам.
В настоящее время ведутся работы по разрешению наиболее грудной задачи — подбору избирательно присоединяющихся'метящих групп. Для этих целей исследования проводятся с искусственными полинуклеотидами [51]. Одноцепочечные нитевидные молекулы этих полимеров наносят на углеродную пленку. На эту же подложку наносят сферы латекса и производят оттене-нне. После этого осуществляют окрашивание ионами тяжелых металлов. При просмотре препаратов, благодаря оттенению, можно обнаружить нитевидные молекулы непосредственно по изображению на экране. Это существенно облегчает исследование. На микрофотографиях на участках, экранированных от оттенения сферами латекса, наблюдаются молекулы полимеров, выявленные в результате присоединившихся к ним ионов тяжелых металлов. Опыты показали, что HAuCU окрашивает полнА, полиГ, полиЦ и не взаимодействует с полиУ [51].
Проведенные Бнром и другими исследования взаимодействия НАиСЦ с мононуклеотидами свидетельствуют о том, что комплекс, образуемый с адениловой кислотой, состоит из одного иона АиСЦ на одну молекулу адениловой кислоты. С другой стороны, было найдено, что урндиловая кислота с этим ионом не взаимодействует. Это согласуется с результатами электронно-микроскопнческнх исследований.
Работы по избирательному окрашиванию нуклеиновых кислот являются примером таких исследований, когда результатов можно добиться, только работая на предельном разрешении микроскопа первого класса. В целом же электроиномнкроско-пическне исследования нуклеиновых кислот хорошо иллюстрирует многообразие подходов при изучении одного и того же объекта методом электронной микроскопии.
Рнс. 21. ДНК фага Т2. Позитивное контрастирование ураиилацета-том препарата, обработанного по методике Кляйншмидта
Рис 24 Поперечный среч хромосомы, состоящей из нитей толщиной 50—100 А
Рис 25. Участок цитоплазмы икринки вьюна, видны митохондрии (Л1), мембраны аппарата Гольджи (АГ), свободно лежащие рибосомы (Р)
Рис. 26. Митохондрии (М) в мышце аксолотля; видны гранулы гликогена (/") в межфибриллярных пространствах. Окраска моноокисью свинца
Рис- 27. Участок цитоплазмы клетки слюнпой железы мотыля. Сложно организованная система мембран эидоплазматичсского ретикулума, покрытых ри босомами (Р). Окраска уранилацетатом
Vj*
2. Исследование ультратонких срезов
. Если в электронный микроскоп рассматривать относительно толстые объекты, как, например, клетки бактерий, растений и животных, то в результате наслоения проекций одних внутриклеточных структур на другие мы не сможем детально разобраться во внутреннем строении таких объектов, мы сможем рассмотреть лишь внешнюю их форму. Кроме того, проходя через толстые объекты, электроны будут их разрушать. Для того чтобы разобраться во внутренних структурных особенностях различных клеток (а иногда и крупных вирусов), необходимо изучение их на ультратонких срезах. При таком исследовании рассматриваются тонкие сечения структур, что, с одной стороны, снимает их маскировку лежащими сверху структурами, а с другой —такие препараты более устойчивы к бомбардировке электронами.
Предыдущая << 1 .. 32 33 34 35 36 37 < 38 > 39 40 41 42 43 44 .. 133 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed