Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лазуркина Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 29

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркина Ю.С.

Лазуркина Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — Наука, 1967. — 343 c.
Скачать (прямая ссылка): fizmetodiisledovaniyabelkov1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 23 24 25 26 27 28 < 29 > 30 31 32 33 34 35 .. 133 >> Следующая

Ранее мы отмечали, что качество изображения объекта зависит от толщины пленки-подложки.
Уменьшение толщины пленки снижает ее механическую прочность.
Слишком тонкая пленка будет разрываться в процессе препарирования или под влиянием пучка электронов. Тонкими пленками можно пользоваться, если применять в качестве дополнительной опоры дырчатые пленки, изготовленные из коллодия и укрепленные слоем углерода.
Известно несколько способов (10] получения дырчатых пленок. Простейшим из них является метод Хаксли i[I3] в модификации В. А. Марихина и Л. П. Романовой [14]. Он основан на том, что при быстром испарении растворителя из раствора коллодия, нанесенного тонким слоем на поверхность стекла, в пленке образуются мелкие сквозные отверстия, размер которых можно регулировать изменением процентного содержания коллодия в растворе. В 0,2—0,3%-ный раствор коллодия в ацетоне или амилацетате погружают чистое стекло. Затем его вынимают и сушат в вертикальном положении. После испарения растворителя на стекле остается голубовато-белая пленка. Ее тщательно счищают с краев и отделяют от поверхности стекла погружением последнего в воду. Понижая уровень воды, в сосуде, плавающую на поверхности пленку опускают на сеточки, размещенные на дне сосуда. После высушивания и контроля качества дырчатой пленки в электронном микроскопе ее укрепляют с одной или с двух сторон слоем распыленного в вакууме углерода. В некоторых лабораториях после нанесения слоя углерода коллодий удаляют, растворяй его амилацетатом.
Рис. 1. Один из способов изготовления коллодиевой пленки
1 — коллодиевая пленка на поверхности воды; 2 — сетка
в. Методы контрастирования молекул белков, нуклеиновых кислот, вирусов
Контрастирование оттенением. Прежде всего производится испарение металла в вакууме. Прн этом атомы металла разлетаются от места испарения по прямолинейным траекториям. Если под некоторым углом к направлению пучка распыляемых частиц поместить исследуемый объект, то на его поверхности будет осаждаться слой металла различной толщины. На участках, расположенных перпендикулярно к направлению полета частиц, образуется наиболее толстый слой. В тех местах, где объект будет экранировать пучок частнц, возникают «тени» (рис. 2). Рассеяние электронов для различных участков объекта оказывается различным, в результате чего контрастность изображения возрастает. В связи со специфическим явлением образования тени, угол между направлением распыляемых частиц и объектом называется углом оттенения, а сам метод — методом оттенення.
На отпечатках микрофотографий оттененных объектов, выполненных непосредственно с негативов, «тени» выглядят светлыми (рис. 3, а). Однако привычнее наблюдать тенн темными. Поэтому микрофотографии таких объектов обычно делаются как негативные отпе-промежуточного позитива
оттенения а — распределение металла и образование тени прн использований метода оттенения; б — образование тени от объекта сферической или цилиндрической формы; I — объект; 2 — поддерживающая нленка; 3 — оттеняющий напыленный слой; 4 — источник испаряющегося металла; h — высота объекта; I — длина тени; t — толщина от-тениющего слоя; 0 — угол оттенения; г — радиус сферической частицы; R — расстояние от испарителя до поверхности
чаткп, сделанные при помощи (см. рис. 3, б).
• Рассматриваемый метод позволяет не только увеличить контрастность изображения, но и установить размеры исследуемых объектов. Действительно, измерив длину тени I и зная угол оттенения В, можно определить высоту объекта h (см. рис. 2, а)
h = l tg 0.
(1)
Рис- 3- Вирус табачной мозаики. Углеродная реплика с предварительным от-тенением сплавом платины с палладием. Отношение длниы- теии к высоте объекта 4 : 1.
«— отпечаток с негатива; б — позитив; I — длина тени; S—ширина частицы; в—схематическое изображение углеродной реплики с предварительным оттенением; частицч ВТМ просматривается вдоль оси
Для сферической или цилиндрической частицы (см. рис. 2, б) радиус частицы г определяется по формуле
r = /tg|. (2)
Для небольших углов оттенения практически можно использовать формулу
D^l tg0, (3)
где D — диаметр частицы. Величина угла оттенения 8 обычно выражается через tg6 или дается как отношение длины тени к высоте объекта, например, 5: 1 или 10:1.
Существенным недостатком метода является ограничение разрешения деталей объекта величиной зерна напыленного металла. Атомы металла, нанесенные на подложку, агрегируют. Величина агрегатов зависит в первую очередь от природы атомов и поверхности подложки. По мере накопления новых атомов размеры агрегатов увеличиваются, образуются кристаллы металла.
При уменьшении угла оттенения неровности слоя металла увели-
чиваются благодаря скоплению атомов в местах попадания первых атомов [15], что на практике приводит к увеличению зерна. На поверхности подложки всегда имеются неровности и загрязнения, например, за счет попадания паров масла из диффузионного насоса. Это также способствует увеличению зернистости при небольших углах оттенения. В напыленных слоях некоторых металлов значительное увеличение зернистости (грануляции) может возникнуть под электронным пучком в процессе просмотра образца.
Предыдущая << 1 .. 23 24 25 26 27 28 < 29 > 30 31 32 33 34 35 .. 133 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed