Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лазуркина Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 102

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркина Ю.С.

Лазуркина Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — Наука, 1967. — 343 c.
Скачать (прямая ссылка): fizmetodiisledovaniyabelkov1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 96 97 98 99 100 101 < 102 > 103 104 105 106 107 108 .. 133 >> Следующая

Измерения производятся в монохроматическом свете, для чего перед источником света V) устанавливается светофильтр (13). Через кювету (4) проходят два параллельных пучка све-
Рис. 18. Схема интерферометра по Релею, применяемая в ультрацентрифуге Spinco Е
та от источника (/), которые формируются коллимирующей линзой (2), параллельными щелями (3) и (5) ,кюветы (4) и двумя неподвижными апертурными щелями (5). Параллельные пучки поворачиваются зеркалом (8) и сводятся линзой (7) в плоскости шлирен-диафрагмы (9), образуя ‘систему интерференционных полос. Эта система увеличивается объективом (10) и цилиндрической линзой (in, так что на анимке (12) получается ряд полос одинаковой интенсивности. Полосы параллельны оси
Рис. 19. Схематическое изображение интерференционной картины
седиментирующей границы
1—18 — номера полос
цилиндрической линзы при отсутствии градиента показателя преломления раствора в кювете и искривлены в областях, где
градиент отличен от нуля. Смещение полосы относительно ли-
d ft
НИИ, для которой о (базовая линия), характеризует изме-
нение показателя преломления раствора. Приращение показателя преломления на расстоянии х от оси вращения ротора определяется по числу полос, пересеченных продолжением базовой линии до точки х (рис. 19), и равно
Д п(х)=-^,
h
где К — длина волны ’монохроматического света (в см); h — путь луча в кювете (в см); N — число полос, пересеченных продолжением базовой линии до точки х.
Число полос в лучшем случае может быть отсчитано с точностью до 0,04 -полосы, что дает более высокую точность определения концентрации, чем метод Филыюта — Свенссона. Среди других интерференционных схем заслуживает внимания примененный Цветковым [5] поляризационный интерферометр, значительно повышающий чувствительность метода.
Абсорбционный метод. Для коэффициентов седиментации биополимеров, особенно нуклеиновых кислот, характерна сильная концентрационная зависимость, что вызывает необходимость проведения исследований при предельно низких концент-
Рис. 20. Седиментационная диаграмма, полученная с применением абсорбционной оптики в ультрафиолетовом свете для раствора Р-л актоглоб улина а — фотография седиментирующей границы; б — результат фотометрирова-ния снимка [27]
Цифры 0—5 относятся к снимку и седиментограмме, полученным в разные последовательные моменты седиментации.
рациях. Такое же требование возникает при работе с препаратами, недоступными в больших количествах. В этом случае применяется абсорбционный метод, в котором для измерения концентраций используется поглощение (абсорбция) света исследуемыми веществами в той или нной области спектра. Большинство веществ биологического происхождения обладает полосами поглощения в близкой ультрафиолетовой области. Поэтому ультрацентрифуги с абсорбционной регистрацией оборудуются кварцевой оптикой и источником ультрафиолетового излучения, которым является ртутная лампа низкого давления. Хлор бромный светофильтр, помещенный перед лампой, отсекает видимую часть спектра лампы и пропускает линии излучения лампы (248, 254 и 265 ммк). Абсорбционная оптика выделяется в отдельный канал и состоит из коллимирующей и конден-сорной линз и фотоаппарата. Поскольку оптическая плотность растворенного вещества прямо пропорциональна его концентрации, метод абсорбцив является самым прямым способом наблю-
t
„ п'ижже опЗергтие
тфстщг лрстиЫла
дения за перераспределением вещества >и движением границ в кювете при центрифугировании. Растворитель выбирают непоглощающим. Тогда на снимке области раствора и растворителя отличаются различной степенью потемнения негатива (рис. 20, а). При этом возможное перераспределение непоглощающих компонент растворителя на фотоснимках Никак не отражается.
При выборе концентрации исследуемого вещества и времени экспозиции необходимо, чтобы степень потемнения негатива была пропорциональна концентрации вещества. Тогда для ее определения достаточно произвести фотометрирование снимка (см. рис. 20, б). Абсорбционный метод позволяет работать с минимальным количеством нуклеиновых кислот — до 0,01 мг/мл, в то время как методы, описанные выше, требуют для измерений не менее 0,5—1 мг/мл. Точность определения концентрации этим методом относительно невелика. Это связано с многочисленными погрешностями фотографического процесса, а также с нестабильностью работы ртутной лампы,
В последнее 'время выпускаются приставки для прямой записи кривых поглощения на самопишущем приборе при помощи фотоумножителя, что значительно облегчает процесс обработки данных {32]. Возможно также применение монохроматора, что позволяет проводить эксперименты лрн различных длинах волн [33]. Это расширяет область применения метода, позволяя работать с веществами, поглощающими в других областях спектра, а также наблюдать за ходом седиментации отдельных компонент сложных растворов.
Предыдущая << 1 .. 96 97 98 99 100 101 < 102 > 103 104 105 106 107 108 .. 133 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed