Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кульберг А.Я. -> "Биохимия мембран. Рецепторы клеточных мембран. Том 4" -> 37

Биохимия мембран. Рецепторы клеточных мембран. Том 4 - Кульберг А.Я.

Кульберг А.Я. Биохимия мембран. Рецепторы клеточных мембран. Том 4 — М.: Высшая школа, 1987. — 103 c.
Скачать (прямая ссылка): receptorikletochnihmembrant41987.djvu
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 46 >> Следующая

появляются белки, сходные по лцганд-связывающим свойствам и особенностям
строения с внеклеточными доменами рецепторных белков, ихПчожно
рассматривать как промежуточные продукты распада рецепторов. Разумеется,
при этом невозможно дать ответ на вопрос, каким именно клеткам
принадлежал данный рецептор.
Ряд наблюдений свидетельствует о возможности выявления в сыворотке
человека и экспериментальных животных белков, сходных по строению и
лигандсвязывающим свойствам с внеклеточными доменами рецепторов.
Рассмотрим первоначально сведения об обнаружении у неиммунизированных
животных белков, связывающих простые гаптены, и об их иммунохимическом
анализе.
Сыворотку от неиммунизированных мышей различных ин-бредных линий
пропускали через колонки с иммобилизованными гаптенами: АРС и ДНФ. После
удаления несвязавшихся белков производили элюцию фиксированного на
колонках материала 2М KI. После разделения элюированного материала
методом молекулярных сит на две фракции они была изучены с помощью
электрофореза в полиакриламиде (в присутствии додецилсуль-фата натрия). В
высокомолекулярной фракции содержался материал с молекулярной массой
свыше 150 000. В низкомоле-
83
кулярной фракции в качестве основного компонента присутствовал белок с
молекулярной массой около 55 ООО.
Этот белок по ряду характеристик был подобен R-белку к тому же^лиганду,
который удается "снять" с поверхности макро-фагови фибробластов с
помощью~трнпсина. Он имел в доступной форме антигенные детерминанты, с
которыми взаимодействуют антивариотипические антитела (см. разд. 3.2),
реагировал с антителами против того же лиганда (см. разд. 5.2). На этом
основании было сделано заключение, что присутствующие в сыворотке белки,
связывающие простые гаптены и имеющие молекулярную массу около 55 000,
представляют собой R-белки, т. е. изолированные внеклеточные участки
соответствующих по специфичности клеточных рецепторов (А. Я. Кульберг и
др., 1986). Эти белки не относятся к фрагментам молекулы антитела, так
как не реагируют с антителами к константным участкам пептидных цепей
иммуноглобулинов. Кроме того, в иммуноглобулинах и их Fab-фрагментах
вариотипические детерминанты находятся в скрытой форме и не доступны для
антител к ним. В описанном белке они экспонированы подобно тому, как это
наблюдается во внеклеточных частях рецепторных белков.
Большой интерес представляет тот факт, что значительная часть
сывороточных /?-белков способна формировать комплексы с сывороточными у-
глобулинами. Комплекс формируется за счет нековалентных взаимодействий, и
для отделения /?-белка достаточно обработать препараты таким детергентом,
как дезоксихо-лат натрия (А. Я. Кульберг, И. А. Елнстратова, 1985).
Изолированный в указанных условиях /?-белок сохраняет свои лиганд-
связывающие свойства. В качестве иммуноглобулинов, связывающих /?-белки,
выступают IgG и IgA (А. Я. Кульберг с соавт., 1986). Для того чтобы
оценить общее количество комплекса /?-белок - иммуноглобулины в различных
препаратах иммуноглобулинов (включая коммерческие), был использован
следующий методический прием. Поскольку в отличие от /^-белков собственно
иммуноглобулины имеют вариотипические детерминанты в скрытой форме,
антитела к этим детерминантам были иммобилизованы на сефарозе, и через
колонки с таким нммуносор-бептом пропускали препараты иммуноглобулинов.
Последние в комплексе с /^-белками связывались иммуносорбептом за счет
/?-белков, а иммуноглобулины, не содержащие /?-белка, прохо дилн через
колонку с иммуносорбентом. Таким способом удалось установить, что
комплекс иммуноглобулинов с /?-белками составляет в среднем около 5% от
общего количества иммуноглобулинов.
Содержащиеся в препаратах иммуноглобулинов и сыворотке крови
иенммунизнрованных особей (человек и экспериментальные животные)
комплексы R-белков с иммуноглобулинами ведут себя в серологических
реакциях (например, реакция гемагглю-тинации) подобно антителам. Уже
давно было известно, что в норме в сыворотке кропи присутствуют антитела
к различным
84
антигенам и гаптенам. В отличие от антител, синтез которых индуцирован в
результате иммунизации, такие антитела получили название естественных. В
свете новых фактов, изложенных выше, становится очевидно, что
естественные антитела представляют собой комплексы иммуноглобулинов с R-
белками, причем именно R-белок в составе комплекса выполняет
лигандсвязыва-ющие функции, а собственно иммуноглобулин служит лишь
носителем. При этом источником /?-белка могут быть и нелим-фоидные
клетки. Так, в частности, удается искусственно получить in vitro
комплексы R-беяка, извлеченного из культуральной жидкости клеток
макрофагального ряда (этот белок специфически связывал АРС) и
иммуноглобулинов класса G.
Среди внеклеточных участков рецепторов, содержащихся в изолированном виде
в культуральной жидкости и сыворотке крови, находятся также фрагменты Fc-
рецепторов. Они высвобождаются лимфоцитами, активированными митогенами
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 46 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed