Индукция ферментов в норме и патологии - Крицман М.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Однако при исследовании отдельными авторами индуцированного образования
триптофанпирролазы в переживающих срезах печени получены неоднозначные
данные. Так, Е. Ф. Ефимочкина (1954) указывает, что при аэробных условиях
в рингер-бикарбонатном глюкозусодержащем буфере в присутствии L-
триптофана активация триптофанпирролазы в срезах печени увеличивается в
пять раз.
78
Civen, Knox (1959), соблюдая условия экспериментов, описанные в работе Е.
Ф. Ефимочкиной, а также используя примененные ею методы определения
активности триптофанпирролазы, не наблюдали субстратной индукции
триптофанпирролазы. Эти авторы показали, что при такой постановке опытов
в присутствии триптофана можно обнаружить лишь стабилизацию активности
исследованного фермента, которая значительно снижается в отсутствие
индуктора. Однако, используя более совершенную инкубационную среду,
которую обычно применяют при изучении культуры тканей, содержащую
аминокислоты, витамины и другие жизненно важные соединения, а также
удлинив сроки инкубации, авторы наблюдали некоторую активацию
триптофанпирролазы в пробах, к которым был добавлен триптофан, и наряду с
этим полное отсутствие эффекта от добавления гидрокортизона.
Feigelson, Greengard (1961а), Chytil, Skrivanova (1963), Knox, Piras,
Tokuyama (1965, 1965a) в опытах in vitro установили, что добавление
циклических АМФ к бескле-точным экстрактам из печени крыс, индуцированных
кортизоном, или к препаратам триптофанпирролазы, преин-кубированных с
гематином, приводит к пятикратному повышению активности этого фермента.
Gray (1966), продолжая эти исследования, показал, что активация
триптофанпирролазы не ограничивается добавлением АМФ, поскольку он
наблюдал, что в экстракте печени крыс, которым был инъецирован кортизон в
присутствии эквимолярных количеств аденозина, гуанозина, гуанина и др.,
происходит более выраженная активация исследованного фермента, чем при
добавлении АМФ.
Сложность природы триптофанпирролазы, множественность факторов, способных
индуцировать этот фермент, а также различие путей, приводящих к повышению
его активности, побудили ряд исследователей заняться выяснением формы
существования триптофанпирролазы в организме, а также механизмом действия
различных индукторов.
После работ Tonaka, Knox (1959), Greengard, Feigelson (1962), Tokuyama,
Knox (1964), Knox, Ogata (1965) стало известно, что в печени белковая
часть этого фермента представлена по крайней мере в трех формах:
апофермента, не связанного с гематиновой простетической группой, фер-
рипорфиринового неактивного латентного фермента и активного
ферропорфиринового комплекса.
79
При изучении индуцированного образования упомянутой ферментной системы
возникал вопрос, отражают ли существующие методы определения
триптофанпирролазы все указанные ее формы. Частичный ответ на этот вопрос
был дан Feigelson, Greengard (1961, 1961а), Greengard, Mendelson, Acs
(1966), Knox, Ogata (1965).
Эти авторы при изучении индуцированной триптофанпирролазы наряду с
исследованием ферментативной активности определяли количество белка
фермента иммунологическим методом. В результате исследований был
установлен определенный параллелизм между этими величинами.
В табл. 9 представлены данные, характеризующие отношение различных форм
этого фермента в контроле, а также при субстратной и гормональной
индукции.
Таблица 9
ОТНОШЕНИЕ ТРЕХ ФОРМ ТРИПТОФАНПИРРОЛАЗЫ ПЕЧЕНИ КРЫС (KNOX, OGATA, 1965)
Животные Формы триптофанпирролазы, %
апофер- мент феррипор- фириновый фермент ферропор- фириновый
фермент тотальный конъюгиро- ванный фермент
Не обработанные Обработанные гидрокортизоном Обработанные триптофаном
56 (59) 1 50 (59) 28(19) 28 (15) 30 (14) 17 (6) 16 (26) 20 (27)
56 (65) 44 (41) 50 (41) 72 (71)
1 Цифры в скобках рассчитаны при определении активности этого фермента в
присутствии аскорбиновой кислоты.
Наряду с этим в серии работ (Greengard, Feigelson, 1960, 1961, 1963;
Feigelson, Greengard, 1962, 1962a, b, c) было выявлено, что в печени
интактных и обработанных гормоном крыс постоянно присутствует
ненасыщенная соответствующим коферментом гематином триптофанпирролаза
наряду с активной, а также так называемая латентная форма, которая может
быть активирована гематином только в присутствии диализабельного фактора
или свежеприготовленных микросом печени.
80
В более поздней работе Greengard, Mendelson, Acs (1966) сообщили
результаты сравнительных исследований, характеризующих количественные
отношения между указанными формами триптофанпирролазы печени интактных к
ibic, а также при субстратной или гормональной индукции. При
использовании надосадочной жидкости печени (полученной центрифугированием
гемогената этого органа при 105 ООО g) и микросом обнаружено, что в
печени интактных крыс отношение апофермента (ненасыщенная форма),
латентного фермента (сюда включается и апофермент), активного фермента
(включая полученный путем трансформации латентной формы апофермента в
