Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Определение каротина в сыворотке (плазме) кровн по Кари н Прейсу в модификации Юдкина. Принцип. Извлечение каротина из белков сыворотки (плазмы) крови производится петролей-ным эфиром или авиационным бензином. Экстинкции экстракта каротина измеряются на фотоэлектроколориметре. Расчет ведут по стандартному раствору калия двухромовокислого.
Реактивы: петролейный эфир (ч.) или авиационный бензин марки Б-70;
96%-ный спирт этиловый;
основной калибровочный раствор. 360 мг калия двухромовокислого растворяют в мерной колбе на 500 мл небольшим количеством дистиллированной воды и затем доводят до метки;
188
рабочий калибровочный раствор. Готовят перед анализом. Смешивают 2,4 мл основного калибровочного раствора и 2,6 мл дистиллированной воды. Приготовленный рабочий калибровочный раствор соответствует интенсивности окраски 1 мг% концентрации каротина.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; центрифуга; центрифужные пробирки; стеклянные палочки.
Ход определения. В центрифужную пробирку вносят 1 мл сыворотки (плазмы) крови, 3 мл 96%-ного этилового спирта, перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют 10 мин при 3000 мин-1. Верхний слой (этиловый спирт) сливают, к осадку добавляют 5 мл эфира, тщательно перемешивают стеклянной палочкой в течение 2 мин. Снова центрифугируют 10 мин при 3000 мин 1. Эфир с экстракцией каротина сливают в пробирку и фотометрируют при синем светофильтре (длина волны 400—500 нм) в кювете с толщиной слоя 1 см против воды. Параллельно фотометрируют рабочий калибровочный раствор калия двухромовокислого, соответствующий по окраске 1 мг% каротина.
Расчет ведут по формуле
X = %Е • 1,0,
где X — количество каротина, мг%; En^ — экстинкция испытуемого образца; — экстинкция калибровочного рабочего раствора; 1,0 — коэффициент для пересчета в мг%.
Примечание. Уровень каротина в сыворотке (плазме) крови при хранении снижается, что следует учитывать при проведении анализов.
Источник: 39.
Клиническое значение. Каротин — основной источник витамина А. Для клинических целей каротин определяют в сыворотке (плазме) крови крупного рогатого скота с 3-месячного возраста. У телят молочного периода его содержание в сыворотке крови очень низкое, поэтому анализы не имеют практического значения. У свиней, лошадей, овец и коз каротин в пищеварительном тракте всасывается только в трансформированной в витамин А форме, т. е. каротин через стенку кишечника не проникает, поэтому в крови, печени и молоке этих животных каротин не обнаруживают или находят следовые концентрации.
Концентрация каротина в крови крупного рогатого скота составляет в пастбищный период 1—2,8 мг%, в стойловый период 0,4—1,0 мг%. Снижение каротина наблюдается при дефиците его в кормах, плохом усвоении вследствие болезней желудочно-кишечного тракта, гепатитах и гепатозах, недостатке в рационах белка и легкоусвояемых углеводов, витамина Bi2, разрушении каротинои-дов вследствие порчи кормов, различных токсикозах, включая нитратные.
189
Флуориметрический метод определения общего тиамина в крови и печени (по Г. Д. Елисеевой). Принцип. Метод основан на окислении тиамина в тиохром, экстракции последнего в органический растворитель и измерении интенсивности флуоресценции.
Реактивы: калибровочный раствор тиамина. 100 мг тиамин-хлорида растворяют в 100 мл 0,01 н. соляной кислоты. Хранят в холодильнике до 1 мес. Рабочий раствор готовят в день определения разведения стандартного раствора в 1000 раз, получают раствор с содержанием тиамина 1 мкг/мл;
2%-ный раствор калия железосинеродистого [K2Fe(CN)O] — красной кровяной соли, свежеприготовленный;
30%-ный раствор натрия гидроксида;
96%-ный спирт этиловый;
0,25моль/л раствор хлористоводородной кислоты; изо-бутиловый (изо-амиловый) спирт, насыщенный водой; 20%-ный раствор натрия карбоната (Na2CO3); 20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты; фосфатаза щелочная лиофильная;
универсальный индикатор или 0,04%-ный спиртовой раствор бромкрезоловый пурпуровый.
Для того чтобы спирты (изобутиловый, изоамиловый, этиловый) не флуоресцировали, их очищают путем взбалтывания с активированным углем и последующего фильтрования до полного отсутствия сине-голубого свечения на флуориметре.
Оборудование: флуориметр типа ЭФ-3; термостат; водяная баня; ступки фарфоровые; стаканчики сахарные (Хагедорна); цилиндры на 100 мл с притертыми пробками; делительные воронки; пипетки; пробирки центрифужные без деления и с делением.
Ход определения. В стаканчик Хагедорна или большую пробирку вносят 1 мл оксалатной крови (2—3 мг оксалата на 1 мл крови), 10 мл 0,25 моль/л соляной кислоты и нагревают в кипящей водяной бане в течение 15 мин для частичного разрушения флуоресцирующих примесей. К теплому раствору при взбалтывании прибавляют по каплям 20 %-ный раствор натрия карбоната до получения pH 5,2 (по универсальному индикатору или по 0,04 %-но-му раствору бромкрезолпурпура). Затем добавляют 2—3 капли хлороформа, 50 мг фосфатазы и перемешивают стеклянной палочкой. Стаканчик закрывают ватной пробкой и выдерживают в термостате 24 ч при 37 °С для ферментативного расщепления кокарбоксилазы.
