Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
* Для определения истинной высоты пиков, особенно с тупой вершиной, следует их боковые стороны удлинить вверх до пересечения. Точка пересечения и берется за истинную высоту.
156
27. Пример расчета поправочпого коэффициента
Класс липидов
Содержание, %
А/Б
Величина коэффициента
А*
Б"
Фосфолипиды
40
6,75
40/6,75
5,92
Холестерин свободный
6
24,0
6/24,0
0,25
НЭЖК
5
5,81
5/5,81
0,86
Триацилглицерины
40
44,9
40/44,9
0,89
Холестерин-эфир
9
12,5
9/12,5
0,72
* А — содержание класса в стандартной смеси. ** Б — фактически обнаруженное содержание.
разделения методом TCX и денситометрии. Получаем поправочный коэффициент (табл. 27).
Аналогичный поправочный коэффициент можно рассчитать и для подклассов фосфолипидов. Хроматограммы, полученные на стекле, можно записывать только на сканиметре. Сначала проводят запись одной пробы, затем другой и т. д., постепенно передвигая пластинку под лучом проходящего света. Результаты регистрируют в процентах.
Для каждого прибора и (или) режима исследований должны быть выведены свои поправочные коэффициенты.
Источник: 6.
3.3.6.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ЛИПИДОВ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (ГЖХ)
Принцип. В основе метода ГЖХ лежат физико-химические свойства летучих соединений по-разному распределяться между двумя фазами: подвижной (инертный газ) и неподвижной (жидкой), нанесенной на поверхность порошкообразного твердого носителя определенного зернения и определенных адсорбционных свойств, где она распределяется в виде тонкой пленки с большой поверхностью и служит растворителем. Компоненты анализируемой смеси (смесь метиловых эфиров жирных кислот), перемещаясь по колонке с помощью газа-носителя, распределяются между газовой и жидкой средами и в соответствии с их коэффициентом распределения селективно удерживаются неподвижной жидкой фазой до тех пор, пока не образуется определенная зона (концентрация) в газе-носителе. Зоны отдельных жирных кислот последовательно выносятся из колонки газом-носителем, попадают в детекторное устройство, вызывают электросигнал, который регистрируется самописцем в виде пика и (или) цифрового изображения.
157
Реактивы: инертные носители неподвижной фазы для хро-матографической колонки: хромосорбы W, Р, G и Т, хромотой N, целит 545 и др. с величиной частиц 40/60, 60/80, 80/100 и 100/120 меш;
жидкие фазы, полярные и неполярные, которые должны обладать следующими свойствами (табл. 28);
28. Свойства жидких фаз
Жидкая фаза
Максимальная рабочая температура, °С
Растворитель
Диэтиленгликольсукцинат (полярная)
190
Ацетон
Диэтиленгликольадипат (полярная)
190
Хлороформ
Полиэтиленгликольсукцинат (полярная)
200
Хлороформ, ацетон
Полиэтиленгликольадипат
200
Ацетон, хлороформ
Апиезон D (неполярная)
300
Хлороформ
ацетон; хлороформ; гексан; бензол; диэтиловый эфир; соляная кислота (ч. д. а.); метанол; петролейный эфир; безводная смесь Na2SO4 и NaHCO3 (2 : 1); стандартная смесь метиловых эфиров жирных кислот; метилирующая смесь: 0,5 н. раствор натрия мети-лата (CH^ONa), или 0,3 н. хлористый водород в абсолютном метаноле, или 0,3%-ный раствор серной кислоты (H2SO4) в абсолютном метаноле.
Оборудование: газожидкостный хроматограф отечественного или зарубежного производства. Прибор состоит из: а) хро-матографической колонки (металлической или стеклянной), содержащей неподвижную фазу, в которой на входе располагается камера ввода анализируемого материала, а на выходе — детектор; б) термостатической камеры, обеспечивающей стабильную заданную температуру для хроматографической колонки; в) самописца; г) баллонов с газом-носителем, водородом и воздухом (для горючей смеси);
микрошприцы (марки Гамельтона) отечественного или зарубежного производства для введения анализируемого материала в камеру — испаритель хроматографа; запасные хроматографиче-ские колонки; расходометр — для определения скорости поступления газа-носителя, водорода, воздуха; силиконовые прокладки для герметизации колонок; пробирки с притертыми пробками на 10 мл; пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл; пипетки бактериологические; груша резиновая (малая); стеклянные ампулы на 10 и 15 мл; колба Бунзена.
Ход определения. После установки и наладки всех (электронных и механических) систем прибора, что выполняется специально подготовленными инженерами, его подготавливают к работе в соответствии с целью и задачами исследований. В подготовительную работу входит: подготовка хроматографической ко-
158
лонки; выбор режима работы прибора и подготовка метиловых эфиров жирных кислот для их разделения.
Подготовка колонки. Эффективность разделения эфиров жирных кислот в значительной степени определяется качеством подготовки хроматографической колонки: ее внутренним диаметром, длиной и качеством набивки (носителем и жидкой фазой). Чаще всего используют металлические колонки (они надежнее стеклянных) с внутренним диаметром 3—5 мм и длиной от 1 до 3 м. Предварительно колонка должна быть тщательно промыта и высушена. Для промывки применяют чистые, профильтрованные реагенты в следующем порядке:
