Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 66

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 60 61 62 63 64 65 < 66 > 67 68 69 70 71 72 .. 246 >> Следующая


139

ки; пробирки с притертыми пробками и делениями на 10 мл; пипетки.

Ход определения. Для анализа берут 0,5 мл сыворотки крови, 0,5 г гомогената тканей или 0,2—0,4 г желтка и экстрагируют по методу Фолча. В две параллельные пробирки вносят экстракт липидов в объеме, соответствующем 0,1 мл сыворотки крови, 0,02 г тканей или 0,01 г яичного желтка, добавляют по 0,6 мл хлорной кислоты и ставят на песчаную баню для сжигания при 180 °С.

После просветления содержимого (через 1—1,5 ч) пробирки охлаждают и, тщательно перемешивая, последовательно добавляют следующие реактивы: по 4 мл дистиллированной воды, по 0,2 мл сульфит-сульфонового реактива и по 0,2 мл раствора аммония мо-либдата. Затем пробирки закрывают и помещают в водяную баню при 100 °С на 10 мин. После охлаждения колориметрируют при длине волны 660 или 830 нм в кюветах с толщиной слоя 0,5—1 см против контрольной пробы (без липидов).

Расчет ведут по калибровочному графику, для построения которого используют двузамещенный фосфорнокислый калий (K2HPO4), высушенный до постоянной массы. 2,194 г реактива растворяют в 500 мл бидистиллированной воды. 1 мл раствора содержит 1 мг фосфора. Из основного раствора готовят рабочий раствор путем 50-кратного разведения водой (в 1 мл содержится 20 мкг фосфора). Если определение оптической плотности проводят на ФЭКе, то калибровочный график строят в пределах от 0,2 до 20 мкг, если же на спектрофотометре, то от 5 до 60 мкг фосфора (табл. 21).

21. Приготовление растаоров для ностроеиия калибровочного графика

№ пробирки
Рабочий раствор K2HPO4, мл
Бидистиллированная вода, мл
Концентрация фосфора, мкг/мл

1
0,1
9,9
0,2

2
0,3
9,7
0,6

3
0,5
9,5
1,0

4
2,5
7,5
5,0

5
5,0
5,0
10,0

6
7,5
2,5
15,0

7
10,0

20,0

Из каждого разведения берут по 2 мл калибровочного раствора, вносят в 2—3 параллельных пробирки и далее проделывают все операции, как описано выше. На основании полученных данных строят калибровочный график.

Содержание общих фосфолипидов обычно выражают через количество содержащихся в них фосфатов — в ммоль/1 л, содержание отдельных фракций — также через содержание фосфатов или в процентах по отношению к сумме фосфора всех фосфолипидов.

140

Пересчет фосфора в фосфолипидах путем умножения на 25 нельзя признать правильным, так как это соответствует только для фос-фотидилхолинов (лецитинов), в молекуле которых содержится 4 % фосфора. В других подклассах фосфолипидов доля фосфора иная.

Клиническое значение. Фосфолипиды поступают в кровь главным образом из печени, поэтому их уровень тесно связан с функциональным состоянием данного органа. Концентрация общих фосфолипидов в норме составляет у крупного рогатого скота 170—250 мг/100 мл, у свиней — 90—200 мг/100 мл. Повышение концентрации фосфолипидов в сыворотке крови отмечается при стеотозе (жировой дегенерации) печени, тяжелой форме сахарного диабета, нефрозе и нефрите, постгеморрагической анемии. Снижение уровня фосфолипидов — частый признак острого и хронического гепатита различной этиологии; оно отмечается также при неполноценном кормлении, особенно белково-витаминной недостаточности, при дисбалансе аминокислот в рационе, алиментарной дистрофии, анемиях.

Определение содержания триацилглицеринов (по Сардесаю и Ман-нингу). Принцип. Метод представляет собой модификацию метода Ван-Ханделя и Зильверсмита (1957) для прямого определения триацилглицеринов. Глицерол, освобожденный омылением, окисляется до формальдегида, концентрация последнего определяется колориметрически с применением реакции Hantzsch. Данный метод позволяет выявить триацилглицерины во всех биологических субстратах — сыворотке крови, печени, мышцах, жировой ткани и др.

Кровь с гепарином или с ЭДТА может храниться в вакуумной пробирке в течение 8 ч. Пробы не замораживают.

Реактивы: экстрагирующая смесь (хлороформ-метанол 2 : 1 или спирт-эфир 3:1);

кремниевая кислота (силикагель), активированная при 105 °С в течение 10—12 ч;

спиртовой раствор калия гидроксида (КОН). 2 г KOH растворяют в минимальном количестве дистиллированной воды и объем доводят 95%-ным этиловым спиртом до 100 мл (основной раствор). Для приготовления рабочего раствора 10 мл основного раствора доводят 95%-ным этиловым спиртом до 50 мл (готовят в день применения);

0,1 моль/л раствор серной кислоты;

0,05 моль/л раствор метперйодата (NaIO4);

0,5 моль/л раствор натрия арсенита (NaAsO2);

ацетил-ацетоновый реактив, pH 6,0 при 25 °С. 150 г аммония ацетата, 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл ацетил-ацетонового реактива растворяют віл дистиллированной воды. Реактив стоек в течение 2 нед при хранении в холодильнике;

141

1%-ный стандартный раствор триацилглицеринов. 1 г триолеи-на или оливкового масла растворяют в 100 мл хлороформа. Хранят в холодильнике, стоек 2 мес.

Оборудование: спектрофотометр или ФЭК; водяная баня; пробирки обычные и центрифужные с делением; колбочки или пробирки на 10 мл; делительные воронки на 25 и 50 мл.

Предыдущая << 1 .. 60 61 62 63 64 65 < 66 > 67 68 69 70 71 72 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed