Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Расчет. Содержание белка (г/л) определяют по таблице 10 с учетом величины показателя преломления рефрактометра. Если температура в камере во время исследования не соответствует 20 °С, то вводят поправку 0,0001 на каждый градус: в случае низкой температуры поправку вычитают, при более высокой — прибавляют.
10. Вычисление общего белка в сыворотке крови по показателю преломления
Показатель пре-
Белок,
Показатель пре-
Белок,
Показатель пре-
Белок,
ломления
г/л
ломления
г/л
ломления
г/л
1,3431
41,6
1,3492
76,8
1,3532
99,9
1,3435
43,8
1,3493
77,3
1,3533
100,5
1,3439
46,0
1,3494
77,9
1,3534
101,0
1,3443
48,1
1,3495
78,3
1,3535
101,7
1,3446
50,3
1,3496
79,1
1,3536
102,3
1,3450
52,5
1,3497
79,6
1,3537
102,8
1,3454
54,7
1,3498
80,2
1,3538
103,3
1,3458
56,8
1,3499
80,8
1,3539
103,9
1,3460
59,2
1,3500
81,4
1,3540
104,4
1,3461
59,7
1,3501
82,0
1,3541
104,9
1,3462
60,2
1,3502
82,6
1,3542
105,4
90
Продолжение
Показатель пре-
Белок,
Показатель пре-
Белок,
Показатель пре-
Белок,
ломления
г/л
ломления
г/л
ломления
г/л
1,3463
60,7
1,3503
83,3
1,3543
106,0
1,3464
61,2
1,3504
83,8
1,3544
106,4
1,3465
61,8
1,3505
84,4
1,3545
107,8
1,3466
62,3
1,3506
84,9
1,3546
107,5
1,3467
62,9
1,3507
85,5
1,3547
108,0
1,3468
63,4
1,3508
86,1
1,3548
108,6
1,3469
64,0
1,3509
86,7
1,3549
109,2
1,3470
64,5
1,3510
87,3
1,3550
109,8
1,3471
65,0
1,3511
88,0
1,3551
110,4
1,3472
65,5
1,3512
88,6
1,3552
110,9
1,3473
66,0
1,3513
89,2
1,3553
111,5
1,3474
66,5
1,3514
89,7
1,3554
112,1
1,3475
67,1
1,3515
90,3
1,3555
112,6
1,3476
67,7
1,3516
90,8
1,3556
113,2
1,3477
68,2
1,3517
91,4
1,3557
113,7
1,3478
68,8
1,3518
92,0
1,3558
114,2
1,3479
69,3
1,3519
92,6
1,3559
114,7
1,3480
70,4
1,3520
93,2
1,3560
115,2
1,3481
71,0
1,3521
94,0
1,3561
115,7
1,3482
71,5
1,3522
94,6
1,3562
116,2
1,3483
72,0
1,3523
95,1
1,3563
116,7
1,3484
72,5
1,3524
95,7
1,3564
117,1
1,3485
73,1
1,3525
96,3
1,3565
117,7
1,3486
73,6
1,3526
96,8
1,3566
118,2
1,3487
74,2
1,3527
97,3
1,3567
118,7
1,3488
74,8
1,3528
97,8
1,3568
119,3
1,3489
75,4
1,3529
98,4
1,3569
119,8
1,3490
75,9
1,3530
98,9
1,3570
120,4
1,3491
76,3
1,3531
99,4
1,3571
121,0
Примечание. Рефрактометрический метод дает ошибку в случаях использования сыворотки со следами гемолиза, содержащего много липидов, билирубина, а также сахара и мочевины. Недостаточное промывание линз между анализами приводит к контаминации последних и завышению результатов. Определение общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции. Принцип. Белки реагируют в щелочной среде с меди сульфатом, образуя соединения, окрашенные в фиолетовый цвет.
Реактивы: 0,9%-ный раствор натрия хлорида (ч. д. а., х. ч.); 0,2 моль/л раствор натрия гидроксида (ч. д. а., х. ч.), свободного от углекислого газа (кипяченая дистиллированная вода);
91
0,5%-ный раствор калия йодида (ч. д. а., х. ч.) в 0,2 моль/л растворе натрия гидроксида. 0,5 г йодида калия помещают в мерную колбу на 100 мл, доводят 0,2 моль/л раствором натрия гидроксида до метки. Реактив стабилен в течение 2 нед при хранении в посуде из темного стекла;
калий-натрий виннокислый 4-водный (сегнетова соль) (ч. д. а.);
меди сульфат 5-водный (ч. д. а., х. ч.);
биуретовый реактив основной. 4,5 г калия-натрия виннокислого 4-водного (KNaCgH4Og • 4H2O) растворяют в мерной колбе на 100 мл в 40 мл 0,2 моль/л раствора натрия гидроксида. После растворения прибавляют 1,5 г меди сульфата (CuSO4) и 0,5 г калия йодида (KI). Перемешивают до полного растворения и доводят до 100 мл 0,2 моль/л раствором натрия гидроксида. Хранят в посуде из темного стекла. Реактив стоек;
рабочий раствор биуретового реактива. Смешивают одну часть основного биуретового раствора с четырьмя частями 0,5%-ного раствора калия йодида. Хранят в холодильнике в темной посуде не более 2 нед;
калибровочный раствор альбумина основной. В пробирку вносят 1 г кристаллического сывороточного (из человеческой или бычьей сыворотки) альбумина и 9 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида. Тщательно перемешивают. 1 мл раствора содержит 0,1 г белка. Хранят в холодильнике. Сывороточный альбумин должен отвечать требованиям стандарта.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; колбы мерные.
Ход определения. К0,1мл сыворотки крови прибавляют 5 мл рабочего раствора биуретового реактива, смешивают, избегая образования пены. Через 30 мин (но не позже чем через 1 ч) измеряют оптическую плотность на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 540—560 нм (зеленый светофильтр) против контроля (5 мл рабочего раствора биуретового реактива и 0,1 мл 0,9 %-ного раствора натрия хлорида).
