Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Перед использованием редукционной колонки ее промывают 25 мл 0,1 н. раствором кислоты хлористоводородной, 50 мл аммонийного буферного раствора, разведенного водой в соотношении 1 : 9. Уровень жидкости в колонке должен быть выше уровня кадмия. Проверяют восстановительную способность колонки, используя стандартный раствор калия нитрата. Процент открытия должен быть не ниже 90, в противном случае кадмий переносят в химический стакан и заливают на 1—2 сут 0,1 н. раствором кислоты хлористоводородной.
Оборудование: ФЭК-56 или другой аналогичный прибор с зеленым светофильтром; редукционная кадмиевая колонка (описание дано в разделе «Реактивы и растворы»); колбы стеклянные различной вместимости; цилиндры мерные.
Ход определения. Для приготовления стандартных растворов 1,465 г калия нитрата растворяют в 100 мл дистиллированной воды. 5 мл раствора помещают в мерную колбу на 1000 мл и доводят до метки водой. В 1 мл содержится 73,25 мкг калия нитрата. Раствор готовят в день проведения анализа из предварительно просушенного при 105 °С калия нитрата. Для приготовления раствора натрия нитрита 1 г натрия нитрата растворяют в небольшом объеме воды, количественно переносят в мерную колбу на 500 мл, доводят объем до метки и перемешивают. Для приготовления рабочего стандартного раствора 25 мл основного раствора переносят в мерную колбу на 1000 мл, доводят водой до метки и перемешивают. Для построения градуировочного графика из стандартного рабочего раствора готовят серию разведений. Для этого 2, 5 и 10 мл рабочего раствора переносят в мерные колбы на 100 мл и
420
доводят до метки водой. Содержание в них натрия нитрата составит соответственно 1,0, 2,5 и 5,0 мкг/мл. Разведения готовят непосредственно перед построением градуировочного графика.
Построение градуировочного графика состоит в следующем. В первую мерную колбу на 100 мл вносят 10 мл воды, в остальные — по 10 мл стандартного раствора каждой концентрации. Затем в каждую колбу вносят по 50 мл дистиллированной воды, добавляют по 10 мл реактива I для проведения цветной реакции и оставляют стоять в темноте в течение 5 мин, после чего добавляют по 2 мл реактива II и снова выдерживают в темноте в течение 5 мин, доводя водой до метки, и перемешивают. В результате реакции образуется раствор красного цвета, интенсивность которого измеряют на ФЭКе с зеленым светофильтром в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм.
Подготовка пробы. 2—10 г измельченного на гомогенизаторе растительного материала или тщательно размолотого на лабораторной мельнице сухого материала помещают в мерную колбу на 200 мл, заливают 100—150 мл дистиллированной воды, добавляют 5 мл насыщенного раствора буры и выдерживают в течение 1 ч при комнатной температуре, периодически перемешивая, или ставят на ночь в холодильник при температуре 0—2 °С. Затем в колбу добавляют по 2 мл реактивов Кареза I и II, доводят объем до метки дистиллированной водой, перемешивают, выдерживают в течение 10—15 мин и фильтруют через складчатый фильтр, предварительно промытый дистиллированной водой. При плохой фильтрации пробу можно центрифугировать. Если фильтрат имеет окраску, его дополнительно пропускают через фильтр с молотым активированным углем, предварительно промытым дистиллированной водой. В фильтрате определяют содержание нитратов и нитритов.
При определении нитритов 10—50 мл очищенного фильтрата помещают в колбу на 100 мл, доводят объем дистиллированной водой до 60—65 мл и проводят цветную реакцию, как при построении градуировочного графика, доводят объем дистиллированной водой до метки, перемешивают и колориметрируют по отношению к контрольной пробе.
При определении нитратов 10—50 мл фильтрата пропускают через колонку с губчатым кадмием, заливая в воронку вместе с водой 5 мл аммонийного буферного раствора. Элюат собирают в мерную колбу на 100 мл. Колонку несколько раз промывают дистиллированной водой, которую сливают в эту же колбу до объема 60—65 мл. Доводят объем в колбе до метки, перемешивают, отбирают на цветную реакцию 10—15 мл и далее поступают, как при построении калибровочного графика. Если оптическая плотность окрашенного комплекса превышает максимальные значения оптической плотности градуировочного графика, то цветную реакцию повторяют с меньшими объемами исследуемой воды или фильтрата.
Расчет содержания нитритов (хі, мг/кг) ведут по формуле
421
v _ С ¦ 200 ¦ 100
x\--—г?-,
m V
где С — содержание нитритов в 1 мл окрашенного раствора, найденное по градуировочному графику, мкг; т — масса пробы, г; К — объем фильтрата для цветной реакции, мл.
Содержание нитратов (х2, мг/кг) вычисляют по формуле
= С 200 -100- 100 . М65 шн = С-200-100 ., InV1V2 K1«
где V\ — объем фильтрата, пропущенного через колонку с кадмием, мл; V2 — объем фильтрата, взятый для цветной реакции, мл; 1,465 — коэффициент пересчета калия нитрита на калия нитрат.
Второй формулой пользуются в случае, если берут весь объем элюата.
Клиническое значение. Обнаружение в кормах нитратов на уровне, превышающем 2000 мг/кг корма, и нитритов выше 100 мг/кг дает основание предполагать, что заболевание и гибель животных связаны с отравлениями нитратами или нитритами. Однако окончательный диагноз можно поставить только после анализа клинических признаков интоксикации (нарушение координации движений, сильно выраженный цианоз слизистых оболочек), исследования крови на метгемоглобин и результатов патологоанатомичес-кого вскрытия (кровь окрашена в темно-шоколадный цвет, плохо свертывается, паренхиматозные органы кровенаполнены).
