Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
407
Клиническое значение. Обнаружение любых количеств фосфина в содержимом желудочно-кишечного тракта позволяет подозревать отравление животных цинка фосфидом. Однако окончательный диагноз может быть поставлен на основании анализа анамнестических данных (использование цинка фосфида для дератизации), клинической картины заболевания (позыв на рвоту у свиней, выпячивание глазных яблок, расширение зрачков, пенистые выделения из носа), а также результатов патологоанатомичес-кого вскрытия (чесночный запах содержимого желудочно-кишечного тракта, кровоизлияния в подслизистую оболочку желудка и кишечника, под капсулу печени и почек).
8.6. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ
Микотоксины — продукты жизнедеятельности микроскопических грибов (плесеней), поражающих зерновые и другие сельскохозяйственные культуры в процессе их вегетации или хранения. Выделено и изучено более 100 микотоксинов, однако практическое значение имеет лишь небольшая их часть. Для России наибольшее санитарно-токсикологическое значение представляют T-2-токсин, дезоксиниваленол (вомитоксин), охратоксин А, афла-токсин Bj и некоторые другие.
Большинство микотоксинов высокотоксичны для животных и относятся к I или II классу опасности с величиной ЛД50 для лабораторных животных менее 50 мг/кг. Отдельные микотоксины обладают дерматонекротическим, гепато-, эмбриотоксическим и тератогенным действием. Микотоксины сравнительно быстро разрушаются в организме животных, практически не накапливаются в их органах и тканях, некоторые из них в небольших количествах могут выделяться с молоком. Поэтому основной метод диагностики микотоксикозов — биологическое или химико-аналитическое исследование на содержание микотоксинов в зернофураже, грубых кормах, пораженных плесенью, а также жмыхах и шротах.
Для определения микотоксинов в кормах используют методы на основе тонкослойной (ТСХ), газожидкостной (ГЖХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В последние годы для этой цели стали широко применять методы на основе им-муноферментного анализа (ИФА).
Определение Т-2-токсина в кормах с применением иммунофер-ментного анализа. Метод разработан Г. П. Кононенко, А. А. Бур-киным, Н. А. Соболевой (1996) и утвержден Департаментом ветеринарии MCX РФ. Предназначен для количественного определения T-2-токсина в кормовом сырье и готовых кормовых смесях, выполняется с применением иммуноферментного анализа (ИФА) и позволяет определять содержание T-2-токсина в пробах до уровня 35 мкг/кг.
408
Краткая характеристика определяемого вещества. T-2-токсин [3-окси-4,15-диацетокси-8-(3-метилбутири-локси)-12,13-эпокситрихотец-9ен], продуцируемый грибами рода Fusarium при поражении различных сельскохозяйственных культур (зерновых, зернобобовых, пастбищных трав), относится к группе высокотоксичных микотоксинов с ЛД50 для лабораторных животных от 4,0 до 10,0 мг/кг. При попадании внутрь с кормами в дозах, превышающих 100 мкг/кг корма, развивается воспаление и изъязвление слизистой оболочки ротовой полости, носа, губ и языка с одновременным развитием лейкопении, увеличением протромбинового времени.
Наиболее часто T-2-токсикоз возникает при использовании в корм животным зерна и соломы, длительное время хранившихся в валках или перезимовавших под снегом и пораженных грибами F. sporotrichioides.
Принцип. Метод состоит в извлечении T-2-токсина из размолотого образца смесью ацетонитрила и воды, очистке экстракта на колонке, заполненной сорбентом, и оценке количественного содержания T-2-токсина методом твердофазного конкурентного ИФА с определением интенсивности окрашенных комплексов с помощью фотометра с вертикальным лучом.
Реактивы: ацетонитрил (ч.);
спирт этиловый;
кислота серная (ч.);
вода дистиллированная;
адсорбент для очистки экстрактов марки К-3 [поставщик ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии, ВНИИВСГЭ, 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, 5, тел.(095) 256-66-22];
T-2-токсин;
аналитический стандарт для ИФА (поставщик ВНИИВСГЭ);
диагностический набор T-2-токсин-ИФА из 8 реактивов: Т-2-АГ, Т-2-АТ, ФК, «БУФЕР-ОТ» (концентрат), «БУФЕР-Р1» (концентрат), «БУФЕР-Р2» (концентрат), «Субстрат», ФДА. Поставщик ООО «Фарматек», 119332, г. Москва, ул. Московская, д. 47;
смесь для экстракции ацетонитрил-вода (425:65);
рабочий раствор серной кислоты: кислота-вода (20:80);
рабочий раствор из реактива «БУФЕР-ОТ» (концентрат). 57 мл воды заливают в колбу на 250 мл и добавляют 3 мл реактива «БУФЕР-ОТ» (концентрат). Колбу встряхивают, наносят маркировку «ОТ».
Оборудование: мельница МРП-1; делитель БИС-1; весы лабораторные технические типа ВЛКТ; фотометр АКИЦ-1; холодильник бытовой; планшеты полистироловые для ИФА, наборные; дозатор с регулировкой для отбора жидкостей на 0,2—1,0 мл; микродозатор для отбора жидкостей на 0,02—0,2 мл; комплект съемных наконечников; штатив лабораторный; резиновая груша № 1; фильтры бумажные с синей лентой; пипетки пастера стек-
409
лянные; колбы на 250 и 1000 мл; цилиндры мерные на 25, 100, 500 и 1000 мл; пробирки П-1-10-0,1 XC