Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Все родентициды относятся к первому классу опасности и могут быть причиной отравлений сельскохозяйственных животных, в том числе птиц. Родентициды из группы антикоагулянтов имеют сравнительно низкую токсичность для птиц. Наиболее часто отравления пестицидами этой группы регистрируются среди свиней в результате поедания небрежно разложенных отравленных приманок. Цинка фосфид высокотоксичен для млекопитающих и птиц,
26 — 4196
401
поэтому отравления этим родентицидом регистрируют у сельскохозяйственных и диких животных всех групп.
Определение зоокумарина в кормах, тканях животных и отравленных приманках (по М. Ф. Болоховец, В. В. Ермакову, 1987).
Зоокумарин — белое кристаллическое вещество, почти нерастворимое в воде и бензоле, растворимое в ацетоне и диоксане. ЛД5о для крыс 4—8 мг/кг, для свиней — 10 мг/кг. Малотоксичен для кур. Выпускают в виде порошка с концентрацией действующего вещества 0,5—1 % с наполнителем, в качестве которого используют крахмал или тальк. Применяют для уничтожения серых крыс и домовых мышей в населенных пунктах, животноводческих помещениях, складах в виде отравленных приманок 5%-ной концентрации по препарату. Отмечены случаи отравления свиней. Кума-риноподобные соединения содержат некоторые растения и образуют микроскопические грибы (плесени). Поэтому необходимо ставить дифференциальный диагноз на отравление.
Принцип. Хроматографические методы основаны на извлечении зоокумарина из кормов и биологического материала органическим растворителем, очистке экстрактов на колонке с алюминия оксидом и последующем определении зооцида в закрепленном слое силикагеля по реакции диазосочетания или в виде метилового эфира на газовом хроматографе с детектором электронного захвата.
Спектрофотометрический метод основан на извлечении зооцида из отравленных приманок, кормов или тканей животных хлороформом с последующей очисткой на колонке с алюминия оксидом и определении натриевой соли зоокумарина по характерному поглощению света в УФ-области спектра при 308 нм.
Метрологические характеристики методов: нижний предел определения методом TCX — 2 мкг, или 0,2 мг/кг зоокумарина в пробе, методом ГЖХ — 1 нг, или 0,02 мг/кг, степень определения — 80 %; спектрофотометрическим методом — 10 мг/кг корма, 0,4 мг/кг мышечной ткани и крови животных.
Реактивы: аммиак водный 25%-ный (ч. д. а.);
ацетон абсолютный. 0,5 л ацетона встряхивают 30 мин с 50 г безводного кальция хлорида, а затем перегоняют на кипящей водяной бане; первые и последние 50 мл дистиллята отбрасывают, а остальное количество собирают в склянку с притертой пробкой. Хранят без доступа воздуха;
диметилсульфат;
2,4-дихлоранилин, насыщенный раствор в 0,33 M соляной кислоты. 1 г вещества смешивают со 100 мл 0,33 M кислоты хлористоводородной и встряхивают 1 ч. Хранят в склянке из темного стекла в холодильнике до 3 мес;
зоокумарин, основной раствор — 1 мг/л. 100 мг зооцида растворяют в 100 мл ацетона;
402
зоокумарина стандартный раствор для УФ-спектрофотометрии, 0,1 мг/мл. 10 мг зооцида растворяют в 2%-ном растворе натрия гидроксида в мерной колбе на 100 мл;
кальция хлорид безводный (ч. д. а.);
калия карбонат (ч. д. а.). Соль растирают в порошок, прокаливают 6 ч при 160 °С и хранят в эксикаторе над безводным кальция хлоридом;
натрия нитрит (х. ч.), 1 %-ный водный раствор свежеприготовленный;
реагент метилирующий. В колбу на 100 мл вносят 5 г безводного калия карбоната, 47,5 мл абсолютного ацетона и 2,5 мл диметил-сульфата. Готовят в день употребления;
проявляющий реактив. Смешивают 2,5 мл 1 %-ного водного раствора натрия нитрита с 25 мл насыщенного раствора 2,4-дихлора-нилина в 0,33 M кислоте хлористоводородной. Готовят 1 раз в неделю;
подвижный растворитель гексан-ацетон 2:1 (по объему).
Оборудование: аналитические весы, шуттель-аппарат; хро-матографические камеры; эксикатор; спектрофотометр СФ-4а или другой аналогичный прибор для измерения поглощения в УФ-об-ласти спектра; колбы Эрленмейера на 50, 100 и 250 мл; чашки для выпаривания № 5 и 10; мерные цилиндры на 50 и 100 мл; мерные колбы на 100 мл; пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл; микропипетки на 0,1 мл; воронки для фильтрования № 3 и 5; пластинки стеклянные размером 9 X 12 см; пробирки длиной 15 см, диаметром 1,5 см, градуированные на 15 мл; колонки стеклянные для хроматографии длиной 35 см, с внутренним диаметром 1,5 см. В качестве колонки можно использовать нижнюю часть бюретки на 100 мл, разрезав ее пополам; газовый хроматограф серии «Цвет-500», ЛХМ-2000 или аналогичный прибор с детектором электронного захвата; колонка насадочная для газовой хроматографии стеклянная длиной 0,75 м, диаметром 3 мм с фазой 5 % SE-30 на силанизированном хрома-тоне 80—100 меш; микрошприцы на 10 мкл; баня водяная; мельница шаровая; ступка фарфоровая; готовые к употреблению пластинки для TCX типа «Силуфол», «Плазмохром», «Армсорб».
Ход определения. Для постановки диагноза на отравление зоокумарином исследуют пробы мышечной ткани, печени и почек. Навеску пробы массой 25 г гомогенизируют, помещают в колбу Эрленмейера на 250 мл. В эту же колбу вносят 10 мл 1 н. серной кислоты. Содержимое перемешивают, добавляют 75 мл хлороформа и встряхивают на шуттель-аппарате 40 мин. Затем в колбу вносят через фильтровальную воронку небольшими порциями (чтобы избежать образования комков) 65 г натрия сульфата. Отделившийся хлороформный экстракт фильтруют в колбу на 200 мл через тампон стекловаты (или обычной ваты). Извлечение зоокумарина повторяют еще раз 50 мл хлороформа, повторяя встряхивание кол-
