Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Титруют экстракт раствором калия гидроксида до эквивалентной точки в интервале pH от 10,0 до 12,0.
После каждого определения электроды обмывают спирто-хлороформенной смесью.
Для определения массы жира одновременно с отбором экстракта для титрования отбирают еще 15 см3 экстракта и помещают его в предварительно высушенную до постоянной массы металлическую бюксу. Бюксу с экстрактом помещают на песчаную баню, нагретую до 200 °С, и выпаривают до полного исчезновения запаха хлороформа (8—10 мин). Наружную поверхность бюксы тщательно очищают от песка, бюксу охлаждают в эксикаторе и взвешивают.
Для сушки жира используют также инфракрасную лампу. Для этого бюксу с экстрактом помещают на асбестовый лист под центр лампы на расстоянии 90 мм от нее и сушат в течение 15 мин. Затем бюксы закрывают крышкой, выдерживают в эксикаторе в течение 10—15 мин и взвешивают.
Массу жира, содержащуюся в 30 см3 экстракта, взятого для титрования, вычисляют по разности бюксы с высушенным жиром и пустой бюксы и умножают на 2.
Кислотное число жира (х) в миллиграммах калия гидроксида на 1 г жира вычисляют по формуле
х= 5,611 KV т '
где 5,611 — массовая концентрации калия гидроксида в растворе молярной концентрации 0,1 моль/дм3, мг/см3; К — коэффициент поправки раствора калия гидроксида; V— объем раствора калия гидроксида, пошедший на титрование, см , т — масса жира, г.
За результаты испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.
Вычисление производят с точностью до второго знака и округляют до первого.
Погрешность методики выполнения измерений составляет +0,4 мг.
25 — 4196
385
7.2.12. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ УРЕАЗЫ В ЖМЫХАХ И ШРОТАХ (ГОСТ 13979.9-69)*
Принцип. Метод основан на изменении pH фосфатного буферного раствора, которое образуется в результате воздействия уре-азы на содержащуюся в растворе мочевину.
Реактивы: мочевина;
известь натронная;
раствор фосфатный буферный образцовый с pH около 7,0;
калия фосфат однозамещенный (KH2PO4) или натрия фосфат однозамещенный 2-водный (NaH2PO4 • 2H2O);
калия фосфат двузамещенный 3-водный (K2HPO4 ¦ 3H2O) или натрия фосфат двузамещенный безводный (Na2HPO4), или натрия фосфат двузамещенный 12-водный (Na2HPO4 • 12H2O);
вода дистиллированная, не содержащая углекислого газа (прокипяченная).
Оборудование: весы аналитические; pH-метр и аналогичный прибор, с пределами измерений от минус 1 до 14 единиц pH с ценой деления индикатора от 0,01 до 0,1; электрокофемолка бытовая или аналогичное измельчающее устройство; баня водяная с терморегулятором или другое термостатирующее устройство, позволяющее поддерживать температуру 30±2 °С; электроплитка бытовая; термометр жидкостный стеклянный, позволяющий измерять температуру в диапазоне 0—50 °С, с ценой деления 1—2 °С; колба мерная; стаканы В-1-100 или В-1-150ТС; колбы конические или колбы плоскодонные; цилиндр; сито с отверстиями диаметром 0,5 мм из набора лабораторных сит.
Подготовка к измерениям. Дистиллированную воду кипятят на электроплитке в течение 15 мин для удаления углекислого газа и охлаждают в колбе, закрытой пробкой и снабженной трубкой с натронной известью.
При отсутствии стандарт-титров (фиксаналов) буферный раствор готовят следующим образом. Предварительно калий одно- и двузамещенный подвергают перекристаллизации. С этой целью отдельно в химические стаканы помещают соли, добавляют немного дистиллированной воды (делают перенасыщенный раствор), нагревают на электрической плитке до полного растворения солей, охлаждают в холодильнике (кристаллы выпадают в осадок через 15 мин), сливают воду и кристаллы высушивают в сушильном шкафу при температуре 110°С, охлаждают в эксикаторе.
Фосфатный буферный раствор с концентрацией 0,05 моль/л готовят из смеси двух растворов одно- и двузамещенного калия фосфата аналогичной концентрации. Для приготовления первого берут 3,40 г и второго — 4,35 г соответствующей соли, полученной
после перекристаллизации, переносят в мерные колбы на 500 см3,
* С изменениями, утвержденными в 1983, 1987 и 1995 годах (ИУС 7-83, 10-87, 6-95).
386
растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, тщательно перемешивают и содержимое доводят дистиллированной водой до метки. Фосфатный буфер с pH 7,0 получают путем
смешивания 233,4 см3 первого и 366,6 см3 второго растворов в
мерной колбе на 1000 см3 с добавлением до метки дистиллированной водой. Водородный показатель (pH) полученного буферного раствора проверяют на pH-метре (раствор А). Полученный раствор А хранят в темном месте не более 1 мес.
Для приготовления буферного раствора Б с мочевиной растворяют мочевину в растворе А в колбе вместимостью 500 или 1000 см3 из расчета 1,5 г мочевины на 50 см3 раствора А. Раствор Б хранят в темном месте не более 10 дней.
Для подготовки образца из средней пробы методом диагонального деления отбирают пробу для анализа массой около 10 г. Измельчают ее до прохода не менее 60 % через сито с отверстиями диаметром 0,5 мм. Остаток на сите вновь измельчают и просеивают через сито. Просеянный материал вновь смешивают с остатками на сите и используют для взятия пробы. При масличности продукта более 2 % после измельчения его обезжиривают.
