Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Чисто рубцовые бактерии должны отвечать определенным требованиям: 1) выделенные из рубца микроорганизмы должны быть анаэробными; 2) бактерии должны присутствовать в рубце в количестве не менее чем 1 млн в 1 мл содержимого; 3) по 10 штаммов данного вида бактерий должно быть выделено не менее чем от двух животных; 4) культуры данного вида бактерий должны присутствовать в рубце животных различных географических зон; 5) конечные продукты обмена веществ полученных культур микроорганизмов должны быть типичными Рубцовыми метаболитами.
В 1 мл рубцового содержимого присутствует 109—1010 бактерий.
Реактив: 0,85%-ный раствор NaCl.
Оборудование: микроскоп; микропипетки.
Ход определения. Содержимое рубца разводят стерильным изотоническим раствором натрия хлорида в соотношении 1:1000. Микропипеткой отбирают 0,01 мл этого разведения и про-фламбированной петлей размазывают его на предметном стекле на площади 1 см2. Как правило, делают 3—4 мазка. Мазок высушивают над пламенем спиртовки и красят по Граму. Готовый мазок исследуют под иммерсией. Подсчитывают бактерии в определенном количестве типичных полей зрения. В связи с тем что мазок не всегда получается равномерным, поля зрения для подсчета необходимо брать по всему мазку, а лучше по диагонали. В каждом мазке подсчитывают не менее 10 полей зрения и выводят среднее значение для одного ПОЛЯ.
Чтобы определить общее количество бактерий всего мазка, уточняют площадь поля зрения микроскопа. Так как площадь круга составляет пг, то необходимо измерить диаметр поля (в мм) с помощью объект-микрометра. Площадь мазка 100 мм2, деленная на площадь поля зрения под микроскопом, равна количеству полей зрения в мазке. Поскольку мазок приготовлен из 0,01 мл жидкости, то количество полей зрения в мазке, умноженное на 100, дает количество полей зрения в 1 мл рубцовой жидкости, разведенной до 10 (1:1000). Все эти арифметические подсчеты можно объединить формулой 10 000 : 3,1417 • г2, где 3,1417 — коэффици-
332
ент, на который следует умножить среднее количество клеток в поле зрения микроскопа.
Таким образом, подсчитав необходимое количество полей зрения (по 10 в трех мазках), суммируют общее количество бактерий и вычисляют среднее количество бактерий в одном поле зрения. Полученное число умножают на коэффициент и степень разведения. Коэффициент остается постоянным до тех пор, пока объектив, положение тубуса и окуляр микроскопа не меняются.
Пример. Определяем коэффициент. Диаметр поля зрения микроскопа 0,132 мм, соответственно его радиус — 0,066 мм, а г составляет 0,004356:
10 000 = 10 000 3,1417 0,004356 0,0137'
Подсчитав 30 полей зрения (по 10 в трех мазках), определили, что в поле зрения в среднем находится 15 микробных клеток.
Соответственно 150 Q^3yQQ • 10°0 = Ю,9 млрд = 1,09 • 1010 микробных клеток в I мл рубцовой жидкости.
6.10. НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ ИССЛЕДОВАНИЯ СОДЕРЖИМОГО РУБЦА
Исследуя содержимое рубца, необходимо учитывать состав рациона, время взятия пробы после кормления и технику зондирования.
При кормлении грубоволокнистыми кормами состав содержимого рубца относительно постоянен в течение 1 ч после кормления. Введение в рацион богатых крахмалом комбикормов изменяет ферментативные процессы в рубце. В нем происходит интенсивное образование ЛЖК за счет пропионовой и масляной, появляется молочная кислота. Аналогичные изменения происходят при скармливании животным избыточного количества легкоусвояемых углеводов (сахарная и полусахарная свекла, патока), но в таком случае происходит образование молочной кислоты. Изменяется качественный и количественный состав микроорганизмов: уменьшается количество грамотрицательных бактерий, увеличивается количество грамположительных.
При анализе результатов исследований содержимого рубца следует учитывать время последнего кормления, поскольку в первые 2—3 ч после приема корма в преджелудках происходит активный гидролиз, что вызывает возрастание количества ЛЖК, аммиака, хлора, калия, соответственно величина водородного показателя (pH) и ионов натрия понижается. Позже, вследствие постепенного затухания ферментативных процессов в рубце и активного усвое-
333
ния продуктов гидролиза, происходит понижение концентрации ЛЖК (особенно пропионовой), аммиака, хлора, калия и повышение pH и содержания натрия. Поэтому при исследовании содержимого рубца пробы следует отбирать в одно и то же время после кормления. Вследствие зондирования животных для получения проб содержимого рубца раздражаются ротовая полость, глотка, кардиальный сфинктер, что вызывает усиленную саливацию. Известно, что слюна щелочной реакции (pH 8,7—9,2), поэтому ее примесь в содержимом рубца может стать причиной изменения pH и других показателей проб. Изменение pH в пробе с примесью слюны особенно показательно при ацидотическом состоянии рубца. Учитывая, что максимальное количество слюны поступает в пробу содержимого в начале зондирования, первые его порции (200 мл) для анализов использовать не следует.
ГЛАВА 7
МЕТОДЫ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА КОРМОВ
