Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Если показатель экстинкции выше диапазона калибровочной кривой, полученный безбелковый фильтрат разводят определенным количеством дистиллированной воды и при расчетах учитываю степень разведения (P) фильтрата. Количество нитритов в этом случае определяют по формуле
X= ?-1500- Р.
6.9. МЕТОДЫ ПОДСЧЕТА МИКРООРГАНИЗМОВ В СОДЕРЖИМОМ РУБЦА
В рубце жвачных существует множество различных микроорганизмов — бактерий и простейших. Благодаря их активной деятельности питательные вещества корма подвергаются сложным превращениям, вследствие чего образуются ЛЖК, аммиак, аминокислоты, используемые организмом в процессе обмена. Наряду с превращением составных частей корма в соединения, доступные для усвоения в преджелудках, происходит синтез жизненно важных аминокислот, витаминов. Поступая в нижерасположенные отделы пищеварительного канала, бактерии и простейшие перевариваются и обеспечивают организм жвачных полноценными белками.
Росту и развитию большого количества разнообразной по составу микрофлоры и микрофауны способствуют определенные благоприятные условия среды в рубце, в том числе pH содержимого, постоянный ионный состав, непрерывное снабжение микроорганизмов питательной средой (кормом), анаэробные условия.
Бактерии и простейшие очень тесно реагируют на изменения кормления и содержания животных. Например, количество инфузорий увеличивается при добавке к рациону достаточного количества сена, углеводистых кормов. Если же в рационе преобладает силос, количество простейших уменьшается, изменяется их видовой состав. Летом при кормлении зелеными кормами их, как правило, становится больше по сравнению с зимним рационом. Почти полностью они исчезают при голодании, патологическом состоянии преджелудков, атонии, тимпании рубца, травматическом ретику-лоперитоните.
Определение количества инфузорий. В рубце у жвачных находится примерно 100 видов инфузорий. Преимущественно они представлены классом Ciliata, в который входят две большие группы: подкласс Holotricha и подкласс Spirotricha. Инфузории первой группы равнореснитчатые (вся их поверхность равномерно покры-
330
та ресничками). Подкласс Spirotricha (малореснитчатые) в рубце составляет 60—80 % общего количества инфузорий.
Наличие в рубце большого количества инфузорий свидетельствует о нормальном и эффективном течении ферментативных процессов. Наиболее чувствительны к изменениям среды рубца большие инфузории. При неблагоприятных условиях существования в рубце они исчезают в первую очередь и появляются при нормализации процессов последними.
Видовой состав простейших определяют только в свежем содержимом рубца. Для этого каплю его наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и рассматривают по микроскопом вначале при малом (окуляр х7, объектив х10), затем при большом (окуляр х7; объектив х40) увеличении в слегка затемненном поле зрения. Поскольку инфузории, особенно большие, при комнатной температуре быстро теряют подвижность, то можно пользоваться столиком с подогревом (температура 38—39 °С). Для более детального определения строения инфузорий препарат лучше покрасить раствором Люголя или приготовить мазок и рассматривать его при большом увеличении или под иммерсией.
Реактив: 0,85%-ный раствор NaCl, слегка окрашенный мети-леновым синим.
Оборудование: микроскоп; счетная камера с сеткой Горяе-ва; лейкоцитарный меланжер.
Ход определения. В пробирку отбирают 5 мл профильтрованного содержимого рубца (жидкую часть) и добавляют 0,1 мл 4%-ного раствора формалина для фиксации инфузорий. Это позволяет подсчитывать количество инфузорий в течение 20—24 ч после взятия содержимого рубца. Содержимое пробирки тщательно перемешивают, набирают жидкость в лейкоцитарный смеситель (меланжер) до метки 1, а до метки 11 — изотонический раствор натрия хлорида, предварительно окрашенный раствором метиленового синего. Встряхивают 1—2 мин и получают разведение пробы в 10 раз.
В камеру с сеткой Горяева под покровное стекло вносят 1 каплю жидкости (первую каплю выдувают на вату). Инфузории подсчитывают в 100 больших квадратах. Общее количество инфузорий в 1 мм3 (1 мкл) определяют по формуле
X = AC/nSh, т. е. X = А ¦ 25,
где X — количество инфузорий в 1 мм3 (1 мкл); А — количество подсчитанных инфузорий; С — разведение пробы; и — количество квадратов, в которых подсчитывали инфузории (100); S- площадь одного квадрата (1/25); h — высота камеры (0,1).
Количество инфузорий в 1 мл содержимого рубца определяют по формуле х = А' 1000, ибо 1 мл = 1000 мкл.
331
В 1 мл жидкости рубца находится от 500 тыс. до 1,2 млн инфузорий. Количество их уменьшается при различных патологиях. Особенно мало инфузорий (70—100 тыс/мл) при смещении сычуга (А. В. Чуб, 2002).
Подсчет бактерий. Бактерии играют важную роль в процессах пищеварения жвачных животных. Они подвергают ферментному расщеплению целлюлозу (основной компонент грубых кормов), крахмал, моносахариды, кислоты (молочную, янтарную, муравьиную), липиды, принимают участие в превращении азотистых соединений. Наряду с основными видами существует ряд бактерий, которые не имеют функционального значения в рубцовом пищеварении, а попадают в рубец с кормом и водой.
