Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
При вторичной дистонии рубца увеличивается содержание изо-валериановой и валериановой кислот. Особенно возрастает их концентрация при смещении сычуга (4,2 ± 0,1 и 7,2 ± 0,9 % соответственно). Вероятно, это объясняется тем, что при снижении в рационе клетчатки бактерии рубца потребуют для своего роста добавки валериановой, изовалериановой и изомасляной кислот (В. Г. Янович, Л. И. Сологуб, 2000).
6.5. ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРОФЛОРЫ РУБЦА
Проба с метиленовым синим (по G. Dirksen). Принцип. Красящее вещество — метиленовый синий, введенное в содержимое рубца (in vitro), обесцвечивается, восстанавливаясь ферментами микроорганизмов.
Реактив: 0,03%-ный раствор метиленового синего.
Оборудование: водяная баня; пробирки или химические стаканчики; стеклянные палочки; секундомер или часы.
Ход определения. В пробирку или химический стаканчик на 20 мл наливают 10 мл свежевзятого содержимого рубца, приливают 0,5 мл (в стаканчик 1 мл) 0,03%-ного раствора метиленового синего и перемешивают стеклянной палочкой. Параллельно ставят контрольную пробу без добавления метиленового синего. Пробирки (стаканчики) перемещают на водяную баню при температуре 38 0C и контролируют время обесцвечивания красящего вещества, сравнивая опытную пробу с контрольной.
У здорового крупного рогатого скота при смешанном типе кормления обесцвечивание наступает за 3 мин. Если же обесцвечивание продолжается 15—17 мин, необходимо обратить внимание на кормление животных (качество корма и режим кормления). Увеличение времени обесцвечивания раствора метиленового синего до 30 мин и более свидетельствует о заболевании преджелудков.
Проба со сбраживанием глюкозы. Принцип. Легкоперевари-мые углеводы, поступающие с кормом в рубец, активно ферментируются микрофлорой до ЛЖК и газов (углекислый, метан, водород). Добавляя глюкозу к содержимому рубца (in vitro), фиксируют активность газообразования и таким образом делают выводы о ферментативной способности микроорганизмов.
Реактив: свежеприготовленный 16%-ный раствор глюкозы.
Оборудование: сахарометр или градуированные пробирки; термостат.
Ход определения. В сахарометре или градуированной пробирке смешивают 10 мл свежего содержимого рубца с 0,5 мл 16%-ного слегка подогретого раствора глюкозы и-ставят в термостат при темпе-
317
ратуре 38 °С. Интенсивность ферментации глюкозы определяют через 30 и 60 мин по величине образованной прослойки газов.
В содержимом рубца здорового крупного рогатого скота при сбраживании глюкозы газовая прослойка толщиной 1 см образуется в течение 30 мин, а через 60 мин она достигает 2 см. При инактивации микрофлоры (ацидоз, алкалоз) количество образовавшихся газов незначительно или их нет совсем. При тимпании рубца газообразование значительно возрастает.
Проба с восстановлением нитратов. Принцип. Внесение калия нитрата в содержимое рубца (in vitro) вызывает его восстановление микроорганизмами и использование азота, характеризующееся исчезновением красного цвета.
Реактивы: 0,025%-ный раствор калия нитрата (KNO3);
реактив 1: 2,0 мл концентрированной серной кислоты смешивают с 200 мл 30%-ного раствора уксусной кислоты;
реактив 2: 0,6 мл а-нафтилина, 16,0 мл концентрированной уксусной кислоты смешивают со 140 мл дистиллированной воды.
Оборудование: водяная баня; пробирки; пластина с ячейками.
Ход определения. ВЗ пробирки наливают по 10 мл содержимого рубца. В первую пробирку вносят 0,2 мл, во вторую 0,5 мл и при необходимости в третью 0,7 мл 0,025%-ного раствора калия нитрата. Пробирки ставят в водяную баню при температуре 39 °С. Через 5 мин из каждой пробирки берут по 1 капле смеси и наносят на пластинку с ячейками. Затем добавляют по 2 капли реактивов 1 и 2. Если восстановление нитратов не наступило, то смесь окрашивается в красный цвет. В случае расщепления калия нитрата микрофлорой в течение 5 мин окрашивание не появляется. При появлении красного цвета продолжают контролировать время обесцвечивания поминутно.
В содержимом рубца здоровых животных KNO3 восстанавливается через 5—10 мин в первой пробирке и через 20 и 30 мин соответственно во второй и третьей. При нарушении ферментативной активности микрофлоры (ацидоз, алкалоз, атонии, гипотонии) время восстановления затягивается или же восстановления вообще не происходит.
Определение целлюлолитической активности микрофлоры. Расщепление грубого корма у жвачных происходит ферментами цел-люлолитических микроорганизмов, которые заселяют рубец во время поедания первых порций сена (примерно в двухнедельном возрасте). Уже в 2—3-месячном возрасте отмечают максимальную целлюлолитическую активность микроорганизмов. Расщепление клетчатки приводит к образованию ЛЖК — источника энергии животных. В преджелудках усваивается 60—70 % клетчатки.
Принцип базируется на способности целлюлолитической микрофлоры переваривать хлопчатобумажную нить (in vitro).
Реактив: 16%-ный раствор глюкозы.
318
Оборудование: термостат; пробирки; стеклянный шарик; натуральная хлопчатобумажная нить № 10 (искусственную или полусинтетическую не используют).
