Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
270
I
Проба Яффе. Реактивы: концентрированная серная кислота; хлороформ; 2%-ный раствор калия перманганата.
Ход определения. В пробирку вносят по 2—3 мл профильтрованной мочи, концентрированной соляной кислоты и хлороформа и 1—2 капли 2%-ного раствора калия перманганата. Пробирку несколько раз переворачивают. Оценивают реакцию после оседания хлороформа. При наличии индикана хлороформ окрашивается в голубой или розовый цвет.
Клиническое значение. В моче здоровых животных ин-дикан содержится в небольшой концентрации, которую качественными реакциями не обнаруживают. Повышенное содержание индикана в моче (индиканурия) наблюдают при интенсивном гниении белков в кишечнике (копростаз, непроходимость кишечника и др.) или при распаде мышц и других тканей.
Обнаружение и определение глюкозы. Проба Гайнеса. Принцип. Метод основан на способности глюкозы восстанавливать в щелочной среде при нагревании гидрат оксида меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета). Чтобы из гидрата оксида меди не образовался черный осадок оксида меди, к реактиву добавляют глицерин, который связывает гидрат оксида меди.
Реактивы: а) 13,3 г меди сульфата (CuSO4 •5H2O, х. ч.) растворяют в 400 мл дистиллированной воды;
б) 50 г натрия (калия) гидроксида растворяют в 400 мл дистиллированной воды;
в) 15 г глицерина (ч. или ч. д. а.) растворяют в 200 мл дистиллированной воды.
Растворы «а» и «б» смешивают и тотчас же добавляют раствор «в». Реактив длительно сохраняется в холодильнике.
Ход обнаружения. Вариант 1. К 6—8 мл мочи прибавляют 20 капель реактива до появления голубоватой окраски, смешивают и нагревают верхнюю часть пробирки до начала кипения. Нижняя часть пробирки — контроль. При наличии глюкозы в верхней части пробирки в моче появляется желтая окраска.
Вариант 2. В пробирку вносят 3—4 мл реактива, 8—12 капель мочи. Кипятят или нагревают до кипения. При наличии глюкозы в моче раствор становится желто-бурым. Чувствительность пробы около 0,03 %.
Глюкозу в моче можно определить специальными мультитести-рованными полосками. Обнаружение глюкозы основано на специфической глюкозо-оксидазно-пероксидазной реакции. Окраска изменяется от желтой (норма) через светло-зеленую в темно-зеленую. Чувствительность в образце мочи, не содержащей аскорбиновой кислоты, около 40 мг/100 мл (2,2 ммоль/л). Результат сравнивают со шкалой через 60 с.
271
Количественное определение глюкозы в моче. Определение глюкозы в моче возможно по цветной реакции с ортотолуидином (см. Определение глюкозы в крови) или поляриметрическим методом.
Поляриметрический метод. Принцип. Метод основан на использовании свойства раствора глюкозы вращать плоскость поляризованного луча вправо. Угол вращения пропорционален концентрации глюкозы в растворе.
Реактивы: 30%-ный раствор свинца ацетата (свинец уксуснокислый).
Оборудование: поляриметр.
Ход определения. Моча не должна содержать белок; если он имеется, то мочу кипятят и фильтруют. Мочу обесцвечивают: к 10 мл ее добавляют 1 мл 30%-ного раствора свинца ацетата, подкисленного несколькими каплями уксусной кислоты, перемешивают и фильтруют. Исследование проводят в кислой среде, так как в щелочной свинец осаждает глюкозу. Глюкоза в моче стабильна при комнатной температуре и 4—8 °С в течение 2 ч, при минус 20 0C — в течение 48 ч.
Трубку поляриметра наполняют прозрачным фильтратом, избегая попадания пузырьков воздуха, накрывают шлифованным стеклом, помещают в аппарат и через 2—3 мин проводят последующие операции, руководствуясь инструкцией к прибору. Работу прибора проверяют по свежеприготовленному раствору глюкозы с известной концентрацией.
Примечание. Определению глюкозы в моче мешают ?-оксимас-ляная кислота, стрептомицин, препараты тетрацик-линового ряда.
Клиническое значение. В моче здоровых животных концентрация глюкозы ничтожно мала и обнаружить или определить ее невозможно. Повышение содержания глюкозы в моче (глюко-зурия) отмечается при сахарном диабете, нарушении почечной фильтрации (почечная глюкозурия, «почечный диабет»), поражении печени, стрессах, гипертиреозе и многих других патологических состояниях. Наибольшее клиническое значение имеет контроль глюкозы в моче при диагностике и лечении сахарного диабета.
Обнаружение кетоновых тел. У здоровых животных в моче содержится незначительное количество кетоновых тел (?-оксимасля-ная и ацетоуксусная кислоты, ацетон), которое качественными реакциями не обнаруживается. Для обнаружения кетоновых тел в моче при их концентрации выше 10—12 мг/100 мл используют пробу Лестраде, Ланге, Ротера, экспресс-тест, кетур-тест, мульти-тестовые полоски, основанные на тесте Летала и др.
Принцип. Натрия нитропруссид в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами, прежде всего с ацетоуксусной кислотой и ацетоном, с появлением окрашивания от сиреневого до темно-фиолетового. При этом чем больше в моче ацетоновых тел, тем интенсивнее окраска.
272
Проба Лестраде. Реактивы: 1 г натрия нитропруссида [Na2(FeCNO2)(CN)5 • 2H2O];
