Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Химическое исследование мочи. Оно включает определение реакции (pH), обнаружение и определение белка, глюкозы, уробилинов, кетоновых тел и других веществ.
Определение pH. Концентрация свободных Н+-ионов — показатель истинной реакции мочи — активной кислотности (pH). Определяют pH в свежеполученной моче с помощью универсальной индикаторной бумаги, тест-пластин или (точно) потенциометром (pH-метр). Универсальная индикаторная бумага дает возможность определять pH в диапазоне от 1,0 до 10,0. Некоторые фирмы выпускают индикаторную бумагу специальных видов, предназначенную для определения pH мочи в диапазоне от 5,0 до 8,0, или ком-
262
бинированные экспресс-тесты (бумажные или пластиковые полоски), которые включают кроме определения величины pH несколько других показателей. Индикаторную бумагу или комбинированные экспресс-тесты (экспресс-полоски) смачивают мочой и немедленно сравнивают появившуюся окраску со стандартной цветной шкалой. При использовании ионометра руководствуются соответствующей инструкцией.
При стоянии pH мочи сдвигается в щелочную сторону из-за распада азотистых соединений, выделения аммиака, соединения его с водой и образования щелочи, а также распада клеточных элементов.
Клиническое значение. В норме pH мочи у крупного рогатого скота 7,0—8,6, у лошадей 7,0—8,5, у овец и коз 7,0—8,5, у свиней 6,0—7,3, у собак и кошек 5,0—6,5. У молодняка молочного периода pH мочи немного ниже, чем у взрослых.
Моча приобретает кислую реакцию при содержании животных на высококонцентратных рационах, при ацидозе рубца, сахарном диабете, кетозе, хронической сердечной недостаточности, лихорадочных состояниях, миоглобинурии, остром гломерулонефрите, голодании, изнурительном поносе, почечной недостаточности, гипо-калиемическом алкалозе (недостаток калия увеличивает секрецию Н+-ионов почечными канальцами). Мочу щелочной реакции наблюдают при алкалозе рубца, хронических инфекциях мочевыво-дящих путей вследствие бактериально-аммиачного брожения (цистит, уроцистит, пиелонефрит).
Обнаружение белка и количественное определение его. Обнаружение белка в моче достигается пробой с сульфасалициловой кислотой, кипячением или использованием специальных экспресс-тестов.
Проба с сульфасалиііяловой кислотой. Принцип. Проба основана на коагуляции белка с кислотой.
Реактивы: 20%-ный раствор сульфасалициловой кислоты.
Ход определения. В пробирку вносят 3—4 мл профильтрованной мочи и 5—6 капель 20%-ного раствора сульфасалициловой кислоты. Появление хлопьев или помутнения в пробе указывает на наличие белка (положительная проба). Чувствительность пробы 0,015 г/л.
Обнаружение белка в моче можно провести специальной тест-бумагой, содержащей буфер и индикатор, изменяющий в присутствии белка окраску от желтой к слабо-зеленой и зеленой.
Чувствительность около 0,06 г/л альбумина. Мультитестовые полоски могут быть использованы для обнаружения в моче альбумина, который появляется при нефропатиях.
Определение белка методом Брандберга—Робертса—Стольнико-ва. Принцип. В основу метода положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что на границе азотной кислоты и мочи при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.
263
Реактивы: 30%-ный раствор азотной кислоты (относительная плотность 1,2) или реактив Ларионовой. 20—30 г натрия хлорида растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, дают остыть, фильтруют и к 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты.
Ход определения.В пробирку вносят 1—2 мл азотной кислоты (или реактива Ларионовой) и осторожно по стенке пробирки наслаивают такое же количество профильтрованной мочи. Появление тонкого белого кольца на границе двух жидкостей между 2—3 мин указывает на наличие белка в концентрации 0,033 г/л. Если кольцо появляется раньше чем через 2 мин после наслаивания, мочу разводят водой и повторяют исследование. Степень разведения подбирают в зависимости от вида кольца (ширины, компактности, времени появления): при нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком — в 4 раза, при компактном — в 8 раз. Разведение подбирают так, чтобы при повторном наслаивании кольцо образовалось между 2—3 мин. Концентрацию белка находят путем умножения 0,033 на степень разведения.
Примечание. Белое кольцо может образоваться в присутствии большого количества уратов; в отличие от белкового уратное кольцо появляется несколько выше границы раздела и растворяется при слабом нагревании.
Турбидиметрический метод с сульфасалициловой кислотой. Принцип. Сульфасалициловая кислота вызывает коагуляцию белков с образованием мутности, интенсивность которой пропорциональна концентрации белка в моче.
Реактивы: 3%-ный раствор сульфасалициловой кислоты;
0,9%-ный раствор натрия хлорида;
калибровочный 1 %-ный раствор альбумина. 1 г лиофилизиро-ванного альбумина (из бычьей или человеческой сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в колбе на 100 мл и доводят до метки тем же раствором, стабилизируют 1 мл 5%-ного раствора натрия азида. При хранении в холодильнике годен 2 мес.