Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кометиани З.П. -> "Биохимия мембран. Кинетика мембранных транспортных ферментов. Том 5" -> 10

Биохимия мембран. Кинетика мембранных транспортных ферментов. Том 5 - Кометиани З.П.

Кометиани З.П. Биохимия мембран. Кинетика мембранных транспортных ферментов. Том 5 — М.: Высшая школа, 1988. — 111 c.
ISBN 5-06001355-3
Скачать (прямая ссылка): kinetikamembranihtransportnih1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 4 5 6 7 8 9 < 10 > 11 12 13 14 15 16 .. 39 >> Следующая

виде:
_________________(Числитель)! А - (Числитель)2 Р________________
(Постоянный член) + (Коэффициент А) А + (Коэффициент В) В + ...
(2.9)
Максимальную скорость в любом направлении определяют как отношение
коэффициента числителя в соответствующем направлении к коэффициенту того
члена знаменателя, который умножают на такой же концентрационный член.
Для (2.9) это будет выглядеть так:
17 (Числитель)! . ,г (Числитель)г
V j - - J V 2 ----
(Коэффициент А) (Коэффициент Р)
Константы Михаэлиса и константы ингибирования определяют как отношение
членов, входящих в знаменатель. Берут такое отношение, чтобы после
исключения одинаковых членов в знаменателе оставался реактант,
соответствующий данной константе, например для констант, ассоциированных
с А, имеем:
Постоянный член . Коэффициент В # Коэффициент ВР Коэффициент А *
Коэффициент АВ * Коэффициент АВР
и т. д.
Константы Михаэлиса, записанные как Ка, Кв, Кр и т. д., для
упорядоченного "уни-би" механизма имеют вид:
ь, Постоянный член ^ Постоянный член
Ад - ~77~ТТ---------j I Ар-¦
Коэффициент А Коэффициент Р
,г Коэффициент Р
Ал-- ~ •
Коэффициент PQ
Константы ингибирования, обозначаемые как Kia, Kip\ Kiq, определяют с
помощью оставшихся членов знаменателя:
жг Коэффициент Р k2 . г. Коэффициент А А /д - ~~" ' - " - ¦ " у A
ip - _ I
Коэффициент АР k\ Коэффициент АВ
•s Постоянный член к5
Коэффициент Q k§
Вводя эти обозначения и умножая уравнение на фактор
___________(Числитель)2
(Коэффициент А) (Коэффициент PQ) * 26
получим уравнение скорости в терминах новых констант:
^eq
•О =-
,, ., . ,, . . KQVXP KpV\Q V\PQ V4AP
KAV2 + V2A+- ---------+ -
Лад Лад *\eq *\IP
где введена еще одна константа, называемая термодинамической константой
равновесия:
г (Числитель)!
A eq rr v •
(Числитель)2
После того как уравнение записано в терминах кинетических констант (Ка,
Кр, Kq, Keq, Kip и др.), последние можно вычислить на основе
экспериментальных данных. Константы Михаэлиса, максимальные скорости и
константы ингибирования можно рассчитать измеряя начальные скорости
реакций. В некоторых случаях для определения констант ингибирования
необходимо исследование ингибирования продуктом. Анализ начальных
скоростей обычно подразумевает варьирование одного из субстратов при
фиксированных концентрациях других субстратов и вычисление наклонов и
пересечений с осями на графиках обратных величин или других способах
представления данных, например на графиках v/S от v или S/v от
S. В работах У. Клеланда (W. Cleland, 1963) и ряда других авторов (J.
Wong, С. Напеэ; 1962; Н. Fromm, 1967; G. Petterson, 1970 и др.)
рассмотрены различные механизмы: упорядоченное связывание субстратов (с
образованием тройного комплекса или без него), пинг-понг механизм (когда
один или более продуктов выделяются до связывания ферментом всех
субстратов), механизмы с неупорядоченным связыванием субстратов в
равновесных или стационарных условиях и другие случаи.
Детальный анализ отдельных механизмов здесь не приводится (см.: М.
Диксон, Э. Уэбб. "Ферменты", 1982). Однако следует отметить, что
рассмотренный подход, а именно определение кинетических констант на
основе анализа наклонов и пересечений с осями, применим только в том
случае, когда уравнение скорости можно привести к линейному виду. Для
уравнений типа Михаэлиса - Ментен это сделать несложно. Для
многосубстратных реакций специально подбирают условия, когда концентрации
ряда субстратов постоянны и являются насыщающими, поэтому можно
пренебречь некоторыми членами уравнения. Для неупорядоченных механизмов с
альтернативным связыванием субстратов в стационарных условиях устранить
квадратичные члены в уравнениях скорости не удается, поэтому для
исследования таких случаев требуется применение каких-то других методов.
2.3. Исследование действия модификаторов
Анализ действия модификаторов на ферментативные реакции не только имеет
первостепенное значение для понимания сложных
27
взаимосвязей и путей регуляции в метаболизме клетки, но и позволяет
выявлять детали механизма действия самих ферментов. В зависимости от
того, увеличивают ли различные вещества скорость реакции или уменьшают
ее, их принято делить на активаторы и ингибиторы. В последнем случае
отдельно рассматривают обратимые и необратимые ингибиторы. Необратимым
считают ингибирование, когда вещество инактивирует фермент, связываясь с
ним столь прочно, что его нельзя удалить ни диализом, ни каким-то иным
способом.
Обратимое ингибирование характеризуется равновесием между ферментом и
ингибитором, причем константа равновесия служит мерой их сродства.
Эффективность действия ингибитора обычно выражают константой Ki-
величиной, обратной сродству фермента к ингибитору.
Подобно другим факторам, влияющим на скорость ферментативной реакции,
обратимые ингибиторы могут изменять величину либо константы Кт, либо
Vmax, либо обеих констант. По этому принципу принято делить ингибиторы на
конкурентные (увеличивающие Кт), неконкурентные (не влияющие на Кт, но
Предыдущая << 1 .. 4 5 6 7 8 9 < 10 > 11 12 13 14 15 16 .. 39 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed