Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кочетов Г.А. -> "Тиаминовые ферменты " -> 45

Тиаминовые ферменты - Кочетов Г.А.

Кочетов Г.А. Тиаминовые ферменты — М.: Наука, 1978. — 234 c.
Скачать (прямая ссылка): tiaminovinoviefermenti1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 86 >> Следующая

Результаты реконструкции пируватдекарбоксилазы Zymomonas mobilis представлены ниже.
126
Перед гель-фильтрацией ферментный препарат был преинкубнрован ьак на стр. 125
* В % от активности, измеренной с добавлением 6,53-10-* М ТГ1Ф и 6,25-10_*М
Опыты ставили так же, как и с пируватдекарбоксила-зой пекарских дрожжей (см. на стр. 125). Пируватдекар-боксилазная активность бесклеточных экстрактов Z. гпо-bilis без добавления кофакторов составляла 84% от активности, измеренной в присутствии насыщающей концентрации тиаминпирофосфата и магния (эксп. 1). В результате гель-фильтрации она снижалась до 74% (эксп. 2). Только тиаминпирофосфат практически не стимулировал активность исходного экстракта. После гель-фильтрации бесклеточных экстрактов, преинкубированных с тиаминпирофосфатом и магнием, сохранялось 79% ферментативной активности (эксп. 3). Таким образом, только 70— 80% фермента связывает кофакторы необратимо (пиру-ватдекарбоксилаза пекарских дрожжей — около 100%. см. выше). Полностью разобщенный фермент частично активировался тиаминпирофосфатом, однако после гель-фильтрации оставалось лишь 14% активности (эксп. 5). Тот же фермент, но проинкубированный с обоими кофакторами, после гель-фильтрации сохранял 71% кататити-ческой активности (эксп. 6). Еще более резкие различия в связывании кофермента, в зависимости от условий эксперимента, наблюдаются при исследовании других ти-аминовых ферментов (табл. 13—15).
В бесклеточных экстрактах из Micrococcus urcae диа-цетилкарболигаза находится почти исключительно в виде холофермента (см. табл. 13, эксп. 1). Однако при гель-фильтрации его количество снижается примерно наполовину (эксп. 2) и еще в большей степени — при повторном пропускании через сефадекс (эксп. 3). Приведенные результаты указывают на то, что в данном случае тнамин-
Помер и условия эксперимента
Активность (без добавок)
1. Исходный экстракт
2. Гель-филырация (эксп. 1)
3. Гель-фильтрация (эксп. 1 -J- ТПФ -J- магний)
4. После отщепления ТПФ
5. Гель-фильтрация (эксп. 4 + ТПФ)
6. Гель-фильтрация (эксп. 4 + ТПФ + магний)
Н4
74
79
0
14
71
127
Т об лица 13
Потребность в кофакторах для дшщетилкирболигазы из Micrococcus игеае [361]
Активность *
Помор и условия эксперимента без добавок с добавлением
8.3-10-* М ТПФ
1. Исходный экстракт 92 —
2. Гель-фильтрация (эксп. 1) 45 80
3. Гель-фильтрация (эксп. 2) 18 —
• В % от активности. и.гчеренноЛ с добавлением 6,Г>310_1М ТПФ и 6,25-10~* М магния.
Таблица 14
Потиеоность в кофакг юрах для ацетом .татсичтетазы из Aerobacter aerogenes [361]
Перед гель-фильтрацией ферментный препарат был преинкубирован
(как на стр. 125)
Активность •
Номер н условия эксперимента без добавок с добавлением
3,9-10---*М
ТПФ
1. Исходный экстракт 01 90
2. Гель-фильтрация (эксп. 1) 61 ---
3. Гель-фильтрация (эксп. 1+ТПФ-[-маг- G7
ний)
* В % от активности, измеренной с добавлением 6,53-Ю~* М ТИФ и 6,25-10~* М магния.
пирофосфат связан с апоферментом обратимо, но диссоциация осуществляется медленно.
В случае ацетолактатсинтетазы из Aerobacter aerogenes (табл. 14) в исходном бесклеточном экстракте обнаруживается примерно 60% холофермента (эксп. 1); ти-аминпирофосфат в нем связан необратимо и не может быть удален пропусканием через сефадекс (эксп. 2). Фермент почти полностью активируется коферментом и в отсутствие металла (эксп. 1). После пропускания через сефадекс фермента, предварительно выдержанною с
128
Таблица 15
Потребность в кофакторах для некоторых тиаминовых фериентов [361]
Перед гель-фильтрацией ферментные препараты были преинкубированы
(как на стр. 125)
Активность *
Номер и условия эксперимента без с добавлением ТПФ М
добавок 1,3-10-* 6,5-10- * 1.3-10-»
Глиоксилаткарболигаза из Е. coli
1. Исходный экстракт 56 78 --- 88
2. Гель-фильтрация (эксп. 1) 48 54 --- 69
3. Гель-фильтрация 52 70 ---
(эксп. 1+ТПФ-1-магнин)
Пируватоксидаза из Proteus vulgaris
4. Исходный экстракт о --- 100 ---
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 86 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed