Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кочетов Г.А. -> "Тиаминовые ферменты " -> 27

Тиаминовые ферменты - Кочетов Г.А.

Кочетов Г.А. Тиаминовые ферменты — М.: Наука, 1978. — 234 c.
Скачать (прямая ссылка): tiaminovinoviefermenti1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 86 >> Следующая

77
заключение неоднократно подтверждалось в литературе [3, 122, 157, 342, 417, 543].
Сложнее обстояло дело с интерпретацией правой части кривой, изображенной на рис. 16 (данные, полученные при pH выше 8). Во-первых, судя по литературным данным, ни для одной из исследованных аминокислот не было получено такой сложной зависимости скорости ее фотоокисления от pH среды. Во-вторых, ни одному из исследованных ферментов не было свойственно такое резкое увеличение скорости его фотоинактивацин при pH выше 8. Поэтому можно было думать, что отмеченный выше характер кривой зависимости скорости фотоинактивации транскетолазы от pH специфичен для данного фермента или снижение ферментативной активности при фотооблучении транскетолазы (во всяком случае— при pH выше 8,0) обусловлено разрушением более чем одного типа функциональных групп фермента.
Фотоокисление свободных аминокислот в модельных системах исследовали многие авторы. Опыты ставили обычно в достаточно жестких условиях, и кроме того, методы, которые использовали для количественного определения аминокислот, не всегда были совершенны. Учитывая все это, мы изучили зависимость фотоокисления свободных аминокислот от pH в тех же условиях, в которых проводили фотооблучение транскетолазы. Их количественное содержание находили с помощью анализатора аминокислот [23].
Характер влияния pH на скорость фотоокнеления триптофана оказался по существу таким же, каким он был и раньше у других авторов.
Кривая зависимости скорости фотоокисления тирозина (рис. 17, а) отличалась от полученной ранее [539], но повторяла кривую ионизации фенольной группы [87]. Последнее является подтверждением того, что фотоокисля-ется только ионизированное фенольное кольцо.
Зависимость скорости фотоокисления свободного гистидина от pH среды (см. рис. 17, б) оказалась по существу такой же, как и зависимость от pH скорости фо-тоинакгивации транскетолазы (см. рис. 16). Наблюдалось увеличение скорости процесса с повышением pH до 7,0, затем ее стабилизация в диапазоне pH примерно от
7 до 8,5 и повторное увеличение при pH выше 8,5. Подобное увеличение скорости фотоокисления гистидина
78
%
Рис. 17. Влияние pH на степень фотоокисления тирозина (а) и гистидина (б) в модельной системе [23]
По оси ординат — степень фотоокисления аминокислоты, % от се исходного содержания
при высоких значениях pH одновременно с дами обнаружили Беллин и Джанкус [87]. Скорость фотоокисления авторы измеряли полярографически по количеству потребленного кислорода.
При фотооблучении разрушается только непротони-рованная форма имидазольного кольца гистидина. В соответствии с этим увеличение скорости процесса фотоокисления данной аминокислоты в кислой среде с повышением pH (левая часть кривой на рис. 17, б) обусловлено депротонизацией атома азота, стоящего в третьем положении имидазольного кольца — его рК, равен б [83, 111]. Скорость фотоокисления свободного имидазола в щелочной среде (при pH выше 9) сохраняется неизменной [23] (кривая в данном случае несколько сдвинута в правую сторону по сравнению с кривой фотоокисления гистидина, что обусловлено различными значениями pKaNs — для имидазола оно равно 7 [83, 121, 164]). Поэтому увеличение скорости фотоокисления свободного гистидина в тех же условиях (правая часть кривой на рис. 17, б), очевидно, связано с повышением реакционной способности его имидазольного кольца, вызванным депротонизацией аминогруппы боковой цепи — ее рКа равен 9,2 [74, 111, 121].
Однако свободной аминогруппы боковой цепи гистидина, естественно, в молекуле транскетолазы нет, тем не менее скорость фотоинактивации фермента (см. рис. 16) резко увеличивается в щелочной среде, точно так же, как
79
и скорость фотоокисления свободного гистидина (см. рис. 17, б). Можно думать, что такая кривая зависимости скорости фотоинактивации от pH среды обусловлена наличием в белковой молекуле группы, характеризующейся таким же значением рКя, что и для свободной аминогруппы боковой цепи гистидина, близко расположенной от фотоокисляющегося имидазольного остатка и влияющей на его реакционную способность.
С>шествует и другая возможность объяснения повышенной скорости фотоинактивации транскетолазы в щелочной среде — разрушение наряду с остатками гистидина также и остатков тирозина. Однако такая возможность нам кажется менее вероятной. И не потому, что фотоокисление свободного тирозина начинается при более низких значениях pH, чем увеличение скорости фо-тоннактивашш фермента (сравни рис. 17, а и рис. 16). Объяснить такое различие нетрудно. Более веским аргументом в данном случае нам кажутся результаты опытов, полученные при исследовании фотоинактивации транскетолазы при разной температуре [24].
Оказалось, что степень фотоинактивации транскетолазы существенно зависит от температуры, при которой проводится фотооблучение. При 2° она ниже, чем при 22°. При этом снижение степени фотоинактивации значительно сильнее выражено при pH 7,5, когда фотоокис-ляется гистидин и практически не разрушается тирозин, чем при pH 9,0, когда способны фотоокисляться и тот и другой (соответствующие величины равны 47 и 16%).
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 86 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed