Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
К исследованию частоты клеток, распознающих антиген в ассоциации с аллогенными молекулами МНС после острого истощения аллореактивных клеток обратились совсем недавно. Для решения этой задачи целесообразнее всего использовать метод лимитирующих разведений. Такой анализ осуществили Сто-кинджер и др. [38]. Использованная ими техника острого истощения включала адсорбцию аллореактивных Т-клеток на монослое аллогенных клеток селезенки. При такой процедуре облученные клетки селезенки прикрепляются к пластику, и отвечающие Т-клетки затем культивируют в течение 1 ч на монослое. Не-прикрепившиеся клетки получают с помощью отмывок и мягкого встряхивания. Этот метод позволяет удалять только предшественники аллореактивных цитотоксических Т-лимфоцитов. Т-клетки, пролиферирующие в СКЛ (в ответ на молекулы МНС класса II), не удаляются.
Если из популяции отвечающих Т-клеток линии А удалить предшественников цитотоксических Т-лимфоцитов, специфичных к молекулам МНС класса I линии Q, то оставшаяся популяция в ответ на стимуляцию инфицированными вирусом Сендай клетками селезенки линии Q может генерировать цитотоксиче-ские Т-лимфоциты, специфичные к аллогенным мишеням линии Q, модифицированным этим вирусом (рис. 15.7). Эти цитотоксические Т-клетки не лизируют сингенных клеток-мишеней линии А, инфицированных вирусом Сендай, хотя
Отношение Е/Т
Рис. 15.7. Цитотоксические Т-клетки, специфичные к вирусу Сендай в ассоциации с аллогенными молекулами МНС. Аллореактивные цитотоксические Т-лимфо-циты удаляли из популяции клеток селезенки линии А с помощью адсорбции на монослое клеток селезенки линии Q. Дальнейшая стимуляция этой популяции клетками селезенки линии Q не вызывала цитотокси-ческого ответа (светлые треугольники), тогда как стимуляция клетками селезенки линии Q, инфицированными вирусом Сендай, вызывает сильный цитотоксический ответ на инфицированные вирусом мишени линии Q (светлые кружки), а также слабый ответ на неинфицированные мишени линии Q (темные треугольники). Эти цитотоксические Т-клетки не лизировали инфицированных вирусом мишеней линии А (темные кружки). Е/Т — отношение числа эффек-торных клеток к числу клеток мишеней, добавляемых в конечном счете в цитотоксический тест. (По [38].)
Отвечающая клетка х Ш
Рис. 15.8. Анализ частоты предшественников ЦТЛ методом предельных разведений. С помощью адсорбции на монослое из популяции клеток селезенки линии А удаляли аллореактивные цитотоксические клетки, специфичные к антигенам линии Q. Неприкрепившиеся клетки затем переводили в культуру. Ряд параллельных культур с небольшим (в расчете на лунку) числом отвечающих клеток стимулировали в присутствии Т-клеточных факторов роста 1) клетками селезенки линии Q (светлые кружки) 2) клетками селезенки линии Q, инфицированными вирусом Сендай (темные кружки) или 3) клетками селезенки линии А, инфицированными вирусом (темные треугольники). Через 6 дней определяли специфическую цитотоксическую активность в каждой культуральной лунке. Данные представлены как зависимость In % отрицательных культур от числа отвечающих клеток на лунку. Частоту предшественников определяли при показателе степени, равном нулю, в вырожденном случае распределения Пуассона для редких событий. (По [38].)
они лизируют в небольшой степени неинфицированные аллогенные мишени линии Q. Эти последние аллореактивные клетки невозможно было получить при I непосредственной иммунизации интенсивно истощенной популяции неинфици- I рованными аллогенными клетками селезенки линии Q. Однако их присутствие | после стимуляции инфицированными вирусом клетками селезенки свидетель- 1 ствует о том, что при использовании метода истощения предшественники алло- | реактивных цитотоксических Т-лимфоцитов удаляются неполностью. Тем не | менее Т-клетки, специфичные к сочетанию вируса Сендай и аллогенных мо- | лекул МНС, оказались доминантной популяцией (при сравнении кривых до- I за — эффект частота этих клеток была приблизительно в 10 раз выше частоты I аллореактивных Т-клеток). I
Именно в составе этой истощенной популяции методом предельных разве- | дений анализировали частоту двух неперекрестных, специфичных к вирусу |
Сендай субпопуляций цитотоксических Т-лимфоцитов, одна из которых рестрик-тирована по сингенным молекулам МНС класса I линии А, а другая — по ал-логенным молекулам МНС класса I линии Q. Как показано на рис. 15.8, частота предшественников Т-клеток с сингенной рестрикцией составляла 1/15 ООО; частота предшественников Т-клеток того же животного с аллогенной рестрикцией — 1/85 ООО. Таким образом, частота предшественников Т-лимфоцитов, рестриктированных по сингенным молекулам МНС, оказалась приблизительно в 6 раз выше. При исследовании ответа на ТНФ-модифицированные клетки в нескольких комбинациях инбредных линий, а также на инфицированные вирусом Сендай клетки селезенки это превышение варьировало от 2 до 10 раз. Подобное предпочтение собственных молекул МНС (в 3—9 раз) наблюдалось при использовании тимоцитов в качестве отвечающей популяции и ТНФ-моди-фидированных сингенных и аллогенных клеток в качестве стимуляторов.
