Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Q 9 400
(AXQ) 74 500
1) Т-лимфоциты мышей Fi вводили облученным реципиентам линии А и иммунизировали БЭ. Клетки грудного лимфатического протока выделяли на 1 —2-й день (отрицательная селекция) или на 4—5-й день (положительная селекция) после введения и затем переносили облученным Р^-реципиентам вместе с антигеном и обработанными антителами к Thy-1 и комплементом клетками селезенки (в качестве источника В-лимфоцитов и макрофагов МФ) иммунных мышей линий A, Q и Fj(AxQ). Через 7 дней определяли количество бляшкообразующих клеток (БОК), специфичных к БЭ.
Таким образом, при анализе in vivo получены те же результаты, что ив исследованиях in vitro, а именно: Т-лимфоциты гибридов Fx состоят из двух субпопуляций, на которые можно избирательно воздействовать. Каждая из этих субпопуляций специфична к одному и тому же антигену в сочетании с продуктами генов МНС одного из родителей.
15.2.6. Клонирование независимых популяций Т-лимфоцитов гибридов Fx
В отличие от исходного определения MHC-рестрикции, т. е. отсутствия взаимодействия различных по антигенам гистосовместимости макрофагов и Т-лимфоцитов, данные по Рх-субпопуляциям нельзя объяснить аллогенными эффектами. Т-лимфоциты гибридов Fx толерантны к антигенам гистосовместимости родительских линий. Кроме того, популяция клеток-стимуляторов обязательно инактивируется облучением или митомицином С, а в некоторых случаях обрабатывается антителами к Thy-1 и комплементом, что приводит к полному удалению потенциально аллореактивных Т-лимфоцитов родительских линий. Таким образом, эксперименты с гибридами Fx убедили большинство клеточных иммунологов в реальности феномена MHC-рестрикции Т-клеточного распознавания. Тем не менее небольшое число исследователей задумывалось над возможностью объяснить эти наблюдения по-иному. В частности, исследователи, изучавшие сложные взаимодействия клеток при индукции супрессорных Т-лимфоцитов (гл. 18), задавались вопросом, нельзя ли объяснить подобные результаты супрессорным механизмом.
Только в самое последнее время были получены данные, однозначно исключающие супрессорный механизм. Такие результаты были получены при изучении клонов Т-лимфоцитов (гл. 30): В этих экспериментах гомогенные популяции Т-лимфоцитов, полученные от одной клетки, характеризовались МНС-рестриктированным распознаванием антигена, т. е. кроме антигена их необходимо было стимулировать макрофагами, несущими определенную молекулу МНС. Результаты экспериментов Средни и Шварца [18] с набором клонов пролиферирующих Т-лимфоцитов мышей Fx (В10.А X В10), иммунизированных
Таблица 15.12. Специфичность МНС рестрикции Т-клеточных клонов мышей
Fi (В10.А X В10) х) (по [18])
Т-клеточный пролиферативный ответ (имп./мин) на ГАТ Спе цифичность Число
в присутствии АПК мышей колоний
без АПК ВЮ.А вю Fi(B10.AX ВЮ.А+ВЮ
ХВЮ)
170 180 41 300 40 000 36 500 ВЮ 6
120 36 500 80 37 400 34 500 ВЮ.А 4
170 180 130 41800 180 Fi(B10.A X ВЮ) 3
1) Тринадцать колоний после клонирования в мягком агаре клеток мышей гибридов F, (ВЮ.АхВЮ), иммунизированных полипептидом поли-(глута минован кислота "“-аланины-тирозин “О (ГАТ), наращивали в жидкой культуре и определяли их специфичность, культивируя по 2x10* T-клеток каждой колонии в присутствии ГАТ (100 мкг/мл) и 10‘ облученных клеток линий В10.А, BIO, F, (ВЮ.АхВЮ) и смеси по 10“ клеток селезенки (АПК) В10 и 10 SB10.А. Пролиферацию определяли спустя 6 дней по включению 3Н-ти ми дина.
синтетическим полипептидом поли-(глутамат60-аланин30-тирозин10) (ГАТ), приведены в табл. 15.12. В соответствии с данными исследований суммарных популяций Т-лимфоцитов было выявлено несколько субпопуляций клонов, специфичных к одному и тому же антигену. Один вид клонов распознавал ГАТ в ассоциации с молекулами МНС линии В10.А. Их пролиферацию стимулировали АПК от линии В10.А или от гибридов Fx (В10.А х В10) мышей, экспрессирующих молекулы Н-2“, но не АПК мышей линии В10. Другой вид клонов
распознавал ГАТ в ассоциации с молекулами МНС мышей линии В10. Эти клоны стимулировали АПК линии В10 и Fx (В10.А х В10), но не В10.А. Два вида клонов представляют две предсказанные популяции Т-лимфоцитов гибридов Flt которые распознают один и тот же антиген в ассоциации с разными молекулами МНС. Поскольку в этих клонах нет примеси других Т-лимфоцитов, в частности Т-клеток супрессорного ряда, ни один тип супрессорных взаимодействий не может более объяснить феномен МНС-рестрикции. Более вероятно, рестрикция представляет, как и было предположено ранее, свойство распознающих структур отвечающих Т-лимфоцитов.
15.2.7. Fj-специфические клоны Т-лимфоцитов
