Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
15.2.3. Молекулы класса I являются элементами рестрикции, распознаваемыми цитотоксическими Т-лимфоцитами
Эксперименты по комплементзависимой цитотоксичности и иммунофлуоресценции с использованием антисывороток против Н-2 показали, что аллельное исключение молекул Н-2К и D не происходит в Т-клетках гибридов Fx. Следо-
вательно, в рамках модели взаимодействия подобных структур (CI) молекулы Н-2К и D не могут быть теми молекулами, которые обеспечивают клеточное взаимодействие. Тогда молекулы CI должны кодироваться тесно сцепленными генами, что вполне возможно, поскольку исходное генетическое картирование проводилось на рекомбинантных мышах. С помощью таких рекомбинантов можно установить только область определенной хромосомы. Очевидно, что в каждой области и субобласти может находиться несколько генов. Следовательно, для идентификации молекул МНС, распознаваемых цитотоксическими Т-лимфоцитами, требовались другие подходы.
Первый подход сводится к использованию антисывороток против молекул К и D для подавления опосредованной Т-лимфоцитами цитотоксичности. Результаты подобного опыта приведены в табл. 15.7. Хотя эти данные убедительно
Таблица 15.7. Подавление функциональной активности вирус-специфических цитотоксических Т-лимфоцитов анти-Н-2-аллоантисывороткой г) по [12])
Т-лимфоциты Сыворотка Выход 51Сг, % Подавление активности
Т-лимфоцитов
1 Нормальные Нет 18±0,4
Н-2*
2 Нет Нормальная 17,7 ± 0,8
3 Иммунные » 43,7±1,2 Нет
Н-2*
4 Нет Анти-Н-2Кк 18,2± 1,0
5 Иммунные Н-2к » 16,7 ± 0,8 Да
6 Нет AHTJi-II-2Kd 16,6 ±1,7
7 Иммунные Н-2к » 53,2±2,1 Нет
1) Мышей СЗН (Н-2к) инфицировали вирусом осповакцины и определяли цитотоксиче-скую активность их клеток селезенки на фибробластах L929 (Н-2к), инфицированных вирусом. Лизис блокировался антисывороткой от Fi (СЗН. ОНХ129) анти-СЗН, содержащей антитела против молекул кЛ (5-я строка), но не нормальной мышиной сывороткой (3-я строка), или антисывороткой от Fi (В10ХА) анти-В10.D2, которая содержит антитела против молекул К*1 (7-я строка).
свидетельствуют о том, что распознавание молекул К и D — условие, необходимое для функционирования цитотоксических Т-лимфоцитов, для окончательного вывода они все же недостаточны. Одна проблема состоит в том, что анти-сыворотки к продуктам К- и D-областей получены с использованием тех же рекомбинантных линий мышей, о которых говорилось выше. Поливалентная антисыворотка могла содержать антитела к продуктам нескольких генов, кодируемых одной и той же областью. Это возражение в настоящее время снято в результате использования моноклональных антител против Н-2К и D. Однако вторая проблема в интерпретации опытов по подавлению цитотоксичности не была решена. Так, не исключена возможность, что молекулы Н-2К и D тесно ассоциированы на поверхности клетки с генетически и структурно различными молекулами клеточных взаимодействий и что последние стерически экранируются антителами, направленными против Н-2К и D.
При изучении линий мышей с #-2.йГь-мутациями были поставлены более четкие эксперименты для определения продукта гена Н-2К как рестрикти-рующего элемента, т. е. закодированного в МНС гликопротеина, который распознают цитотоксические Т-лимфоциты в сочетании с антигеном. Структурные исследования молекулы Кь свидетельствуют о том, что мутации привели
к заменам от одного до трех аминокислотных остатков (гл. 14). Используя две такие мутантные линии, H-2bml и Н-2Ьтб, Цинкернагель [13] показал, что цито-токсические Т-лимфоциты, полученные к вирусу осповакцины или вирусу JIXM у мышей Н-2КЬ, не лизируют инфицированные вирусом клетки-мишени мутантных мышей (табл. 15.8), и наоборот. Следовательно, сама молекула Кь, по-видимому, является рестриктирующим элементом, поскольку вариации ее структуры могут менять специфичность индуцируемых цитотоксических Т-лимфоцитов и природу распознаваемой антигенной молекулы.
Таблица 15.8. Определение молекул Кь' как рестриктирующего элемента с помощью мутантов Н-2 1) (по [13])
М акрофаг альные Н-2 Выход ысг из клеток-мишеней, %
К D неинфицированные инфицированные
В10.А (5R) Ь d 27,6 60,2
C57BL/10 Ь Ь 18,9 62,7
bml Ьа Ь 29,6 27,1
Ьтб bf Ь 25,0 32,9
В10.А (2R) к Ь 23,6 22,7
1) Мышей В10.A (5R), несущих нормальную молекулу К , инфицировали вирусом осповакцины и затем определяли цитотоксическую активность клеток селезенки против меченных ысг макрофагов различных линий. Выход MCr из клеток сингенных мишеней В1 0.А (5R), инфицированных вирусом, был достоверно выше, чем из неинфицированных мишеней. C57BL/10 мишени, также несущие молекулу Кь, лизировались с одинаковой эффективностью. В отличие от этого инфицированные вирусом мишени bml и Ьт2, экспрессирующие мутантные молекулы К*\ не лизировались, как и аллогенные мишени В10.А (2R), которые экспрессируют другой аллельный продукт области К-Кк.
