Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Однако дальнейшие исследования в ряде лабораторий показали, что CCKJI представляют собой специфический иммунный ответ. Создание системы определения вторичного ответа позволило выявить в этой реакции специфичность и иммунологическую память. На рис. 15.20 показан эксперимент Векслера и Козака [77], проведенный с CCKJ1 человека, которая, согласно кинетике вторичного ответа, достигала пика на 3-й день в отличие от первичного ответа с пиком на 7-й день. На рис. 15.21 представлено исследование Глимчера и др. [78] мышиной CCKJI, в котором продемонстрировак хороший вторичный ответ на популяцию сингенных клеток-стимуляторов BALB/c, но только слабый ответ на популяцию аллогенных клеток-стимуляторов СЗН. Эти результаты показывают, что реакция CCKJI характеризуется памятью (более быстрый вторичный ответ) и специфичностью (ответ на сингенные, но не аллогенные клетки), т. е. признаками иммунного ответа.
Последующие исследования показали, что этот ответ Т-клеток также ре-стриктирован по МНС. Это было показано двумя путями. Во-первых, Ямашита и Шивах [79] в опыте по положительной селекции обнаружили (см. табл. 15.9), что у морских свинок Fj существуют две популяции Т-лимфоцитов, отвечающих в CCKJI, каждая из которых специфична к продуктам одного из двух родитель-
Таблица 15.41. Выявление независимых субпопуляций Т-клеток, вызывающих реакцию CCKJI у морских свинок гибридов Fa х) (по [79])
Клетки, стимулировавшие Пролиферативный ответ (имп./мин) во вторичной
первичную культуру культуре на стимуляторы
Линия 2 Линия 13
Макрофаги линии 2 100 500 7900
Макрофаги линии 13 12 700 32300
!) Т-клетки лимфатических узлов морских свинок Fi(2xi3) культивировали в течение 14 дней с перитонеальными макрофагами линии 2 или линии 13. Клетки, полученные из таких культур, рестимулировали выделенными макрофагами линии 2 или 13 и спустя 4 дня пролиферативный ответ оценивали по включению зн-тимидина (имп./мин.).
ских гаплотипов МНС. Как показано в табл. 15.41, при первоначальной стимуляции Т-клеток гибрида Fx (2 X 13) макрофагами родительской линии 2 рестимуляция во вторичной культуре дает сильный ответ, тогда как рестимуляция
с
I
Время, дни
Рис. 15.20. Реакция CCKJI характеризуется иммунологической памятью.
Очищенные Т-лимфоциты человека были стимулированы облученными аутологичными «не-Т»-клетками; затем определяли пролиферативный ответ в зависимости от времени культивирования. Через 9 дней, когда первичный ответ снижался, клетки из оставшихся культур отмывали и повторно стимулировали облученными аутологичными «не-Т»-клетками. Вторичный ответ достигал пика через 3 дня в отличие от первичного ответа, который достигал максимума за 6—7 дней. (По [77].)
Время, дни
Рис. 15.21. Реакция CCKJI характеризуется специфичностью.
Т-клетки селезенок безмикробных мышей BALB/c стимулировали in vitro обогащенными в градиенте концентрации БСА облученными сингенными клетками селезенки мышей, содержащихся в обычных условиях. В эти культуры было добавлено 2% человеческой сыворотки. Через 14—17 дней выжившие клетки были повторно стимулированы в культурах, содержащих нормальную мышиную сыворотку и нефракциониро-ванные клетки селезенки безмикробных сингенных мышей (светлые кружки), нефрак-ционированные клетки селезенки обычных аллогенных мышей СЗН (квадраты) или, в качестве контроля, не содержащих клеток селезенки (темные кружки). (По [78].)
макрофагами родительской линии 13 не дает ответа. Во-вторых, Глимчер и др. [78] показали с помощью радиационных костномозговых химер, что МНС-специфичность Т-лимфоцитов в CCKJ1 определяется микроокружением облученного реципиента, в котором клетки созревают. Таким образом, как видно
Таблица 15.42. Т-лимфоциты химер 1'\ (к. м.) Pt (обл.) в реакции CCKJI преимущественно отвечают на клетки-стимуляторы Рх *) (по [78])
Источник Т-клеток Пролиферативный ответ (имп./мин) на
B10 В10.А
Fx (BIO х В10.А) (к. м.)В10(обл.) 47 300 2800
Fx (BlOx В10.А) (к. м.) -> В10.А (обл.) 4100 40900
Нормальные Fx (BIO X В10.А) 30 000 27 100
*) Мышей В10 или В10.А облучали в летальной дозе (950Р) и затем им вводили костный мозг мышей Fi(BlOxBlO.A), из которого были предварительно удалены Т-клетки. Спустя 3-6 мес Т-клетки этих химер Fi(k. м.) Pi (обл.) стимулировали облученными селезеночными клетками В10 или В10.А низкой плотности, фракционированными в градиенте концентрации бычьего сывороточного альбумина. Включение тимидина определяли через 6 дней (имп./мин).
из табл. 15.42, Т-клетки химер Fj (BIO X В10.А) (к. м.) В10 (обл.) дают
сильную реакцию CCKJI при стимуляции клетками селезенки В10 и лишь слабый ответ на клетки селезенки В10.А. Т-клетки химер Fx (BIO х В10.А) (к. м.)-* В10.А (обл.) дали противоположные результаты, сильную реакцию CCKJI при стимуляции клетками селезенки В10.А и слабый ответ CCKJI на клетки селезенки В10. В контроле Т-клетки нормальных мышей Fx (BIO х В10.А) давали одинаковый ответ на оба вида стимуляторов. Выраженное предпочтение в ответе химерных клеток, вызывающих CCKJI, на стимуляторы реципиента указывает, что эти Т-клетки способны распознавать только определенные молекулы МНС и что такая способность к распознаванию является приобретенным свойством. Исследования блокирующего действия антител в опытах на морских свинках и мышах свидетельствуют о том, что критическими, распознаваемыми в CCKJI рестриктирующими элементами являются молекулы МНС класса II.
