Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Вопрос прояснился, когда Средни и Шварц [741 обнаружили антиген-сне-цифический пролиферирующий Т-клеточный клон, который был специфичен также к аллоантигенам (табл. 15.39). Этот клон линии мышей В10.А одинаково хорошо отвечал на ДНФ-ОА в ассоциации с собственными молекулами МНС класса II, кодируемыми в субобласти 1-Аа, и на аллогенные молекулы МНС класса II субобласти 1-А$ в отсутствие антигена (например, клетки селезенки B10.S; табл. 15.39). Все остальные исследованные популяции аллогенных кле-
Таблица 15.39. Аллореактивность антиген-специфического пролиферирующего Т-клеточного клона1) (по [74])
Облученные Гаплотип Антиген Пролиферативный
клетки-стимуляторы МНС ДНФ-ОА ответ субклона
5.6 (имп./мин.)
В10.А а 200
В10.А а + 39200
В10 Ъ 200
B10.D2 d --- 400
В10.М / --- 50
В10.Р Р --- 200
B10.Q Ч --- 100
B10.RIII г --- 50
B10.S S _ 36 300
B10.PL и --- 100
*) Мышей В10.А иммунизировали антигеном ДНФ-ОА и иммунные Т-клетки стимулировали in vitro антигеном в присутствии сингенных клеток селезенки, а затем клонировали в мягком агаре. Т-клеточные колонии отделяли, выращивали in vitro и дважды реклонировали. Специфичность полученных клонов определяли в системе Т-клеточноЙ пролиферации. Клетки селезенки мышей, несущих различные гаплотипы МНС, служили клетками-стимуляторами в присутствии и в отсутствие антигена.
ток вообще не вызывали стимуляции. Данный клон был получен методом клонирования в мягком агаре через 3 дня после вторичной стимуляции in vitro ДНФ-ОА иммунных Т-клеток лимфатических узлов мышей В10.А. Этот метод клонирования исключает продолженную стимуляцию длительно культивируемых клеточных линий in vitro и тем самым снижает вероятность селекции необычных соматических вариантов. Клетки исходной колонии несколько раз реклонировали в мягком агаре с высокой эффективностью, чтобы убедиться в том, что двойная специфичность является свойством одной и той же клетки. Наконец, этот клон можно было стимулировать аллогенными клетками селезенки в отсутствие фактора роста Т-клеток. Действительно, клон удавалось поддерживать в культуре, используя клетки селезенки B10.S, вместо ДНФ-ОА и клеток селезенки В10.А. Таким образом, в отличие от цитотоксического клона и аллоантиген, и чужеродный антиген в ассоциации с собственными молекулами МНС могли вызывать пролиферацию этого антиген-реактивного Т-клеточного клона.
Из этих данных очевидно, что существуют антиген-специфические Т-клетки, которые характеризуются аллореактивностью. Следующий вопрос состоял в том, насколько часто подобные клетки встречаются во всей популяции Т-лимфоцитов. Первыми к этому вопросу обратились Шварц и Средни [75], Которые иммунизировали ДНФ-ОА мышей конгенных по МНС линий В10.А, В10 и B10.S и с помощью клонирования в мягком агаре выделили от 20 до 40 антиген-
специфических колоний каждой линии. Затем определялась аллореактивность выросших колоний Т-лимфоцитов против клеток селезенки 8 различных гаплотипов МНС. Как показано в табл. 15.40, была обнаружена высокая частота колоний Т-клеток, характеризующихся и антигенной специфичностью, и аллореактивностью. В совокупности эта частота составляла 28%. В дальнейшем сходные данные получили Джейнуэй и Конрад (Janeway, Conrad), обнаружившие, что 6 из 29 (20%) ОА-специфических Т-клеточных колоний мышей
Таблица 15.40. Высокая частота антиген-специфических Т-клеточных колоний с сопутствующей аллореактивностью х) (по [75])
Аллогенные стимуляторы Число аллореактивных колоний мышей
В10.А B10 B10.S
В10.А 1 0
В10 0 --- 0
B10.D2 2 1 0
В10.М 1 1 6
В10.Р 0 1 3
B10.Q 0 0 2
B10.RIII 1 0 1
B10.S 4 0 ---
B10.PL 0 0 2
Общее количество 8/38 4/21 14/32
Частота, % 21 19 44
1) T-клеточные колонии, специфичные к антигену ДНФ-ОА, были получены от мышей В10.А, В10 или B10.S, их аллореактивность определяли, как описано в табл. 15.39.
BALB/c обладают также и аллореактивностью. Если представить эти данные как функцию от числа исследованных независимых гаплотипов МНС (процент антиген-специфических колоний с аллореактивностью, деленный на число исследованных гаплотипов), то полученные значения частоты в отдельном эксперименте колебались от 2,5 до 5%. Это хорошо коррелирует с частотой аллореактивных пролиферирующих клеток на любой аллогенный гаплотип во всей популяции Т-лимфоцитов и указывает на то, что отобранные колонии представляют всю популяцию. Более того, если учитывать, что только 8 гаплотипов МНС использовалось для исследования аллореактивности, а в пределах вида установлено существование приблизительно 50 независимых гаплотипов МНС для молекул класса II, то можно сделать вывод, что даже те Т-клеточные колонии, у которых отсутствует аллореактивность, проявят ее при исследовании всех независимых гаплотипов. Таким образом, эти данные свидетельствуют, что субпопуляция аллореактивных Т-клеток в большой степени перекрывается с Т-клеточной популяцией, специфичной к чужеродным антигенам в ассоциации с собственными молекулами МНС. Описанные наблюдения прямо противоположны исходному предсказанию модели Ерне [68], что эти две субпопуляции не перекрываются (рис. 15.15).
