Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 85

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 79 80 81 82 83 84 < 85 > 86 87 88 89 90 91 .. 100 >> Следующая

В большинстве автоматических систем образцы отбирают из пробирок или кювет, установленных в держателе, имеющем форму круглой или прямоугольной кассеты. Каждое гнездо держателя имеет номер, позволяющий идентифицировать образцы. Из каждой пробирки отбирают определенное количество анализируемого образца и переносят его в реакционную пробирку, в которую затем добавляют реагенты.
Важным и трудным моментом на этом этапе является переход от одной пробы к другой. Капля образца, оставшаяся в распределительном наконечнике, может переноситься со следующим образцом, и если первый образец содержит анализируемое вещество в высокой, а следующий образец — в низкой концентрации, то это загрязнение может сильно повлиять на результат. В известной степени эту проблему можно решить путем добавления вслед за образцом через тот же
наконечник фиксированного и значительно большего количества применяемого в данной методике разбавителя. Практически, если концентрации образцов различаются более чем на порядок, то для того, чтобы не происходило загрязнения одного образца другим, объем смыва должен превышать объем образца не менее чем в трн раза.
Другая проблема, связанная с перенесением образцов в реакционные пробирки, состоит в том, что наконечник, при помощи которого отбирают образец, может забиваться присутствующим в образце нерастворенным материалом, особенно в тех случаях, когда образец представляет собой плазму крови. При ручной работе пипеткой оператор может обнаружить и ликвидировать эту неполадку, тогда как автомат на это не способен и в результате может выдать образец в неполном объеме.
12.3. Добавление реагентов
Способ добавления реагентов зависит от того, какой из двух основных приемов автоматизации использован: дискретная система или непрерывно-проточная. В дискретной системе образцы и реагенты разливаются в индивидуальные реакционные пробирки (при необходимости — в параллельные пробирки) через систему механических шприцев или перистальтических насосов. Такого типа приборы достаточно широко применяются как составная часть современных полуавтоматических систем и различаются между собой главным образом тем, что в одних случаях дозаторы неподвижно закреплены и мимо них механически передвигаются пробирки (как, например, в приборах LKB 2071 или Micromedic System), а в других — передвигаются дозаторы, укрепленные на механических насадках, а пробирки остаются неподвижными; возможны также комбинации обоих принципов (как, например, в приборах Analmatic system). В проточных системах (Technicon) реакционная смесь непрерывно циркулирует в замкнутой трубке, а следующие друг за другом образцы или параллельные пробы разделяются с помощью пузырьков. Поток жидкости поддерживается при помощи перистальтического насоса, а реагенты подаются через боковые отростки, снабженные регулирующими клапанами.
12.4. Инкубация
Инкубация может проводиться как в самой автоматической системе, так и вне ее. В большинстве современных методов анализа инкубация занимает значительно больше време-
ни, чем все остальные стадии, н в этих случаях приходится проводить инкубацию вне автоматической системы. В дискретных системах реакционные пробирки располагаются в кассете, которую можно вынимать, инкубировать в соответствующих условиях и по окончании инкубации возвращать в систему. В проточной системе поток жидкости можно останавливать, а цепь с образцами вынимать и переносить в соответствующие условия.'
Автоматы, особенно проточного типа, хорошо подходят для неравновесных методов анализа, описанных в разд. 8.2.4. В этом случае при хорошо разработанной методике можно добиться исключительно высокой чувствительности при очень коротких временах инкубации, причем принцип проточного процесса обеспечивает одинаковое время инкубации для всех проб. Дальнейшие усовершенствования в этом направлении ожидаются с большим интересом.
12.5. Разделение свободного и связанного лиганда
Эта стадия анализа является одной из самых продолжительных, поскольку она почти всегда включает добавление агента для осаждения связанного или свободного лиганда, центрифугирование для отделения- нерастворимой фазы и удаление растворимой фазы перед измерением радиоактивности (см. гл. 5). Этот этап труднее, чем остальные, поддается автоматизации, и все попытки, которые делаются в этом направлении, можно назвать скорее остроумными, чем успешными. Поскольку еще не существует какого-то общего подхода к автоматизации процесса разделения, мы вкратце перечислим реально доступные в настоящее время системы.
1) Система Kemtek 3000. В этой системе после добавления осаждающего агента содержимое реакционной пробирки переносится на фильтры (изготовленные из ацетата целлюлозы, поликарбоната, стекловолокна или бумаги), помещенные на эластичную ленту из пластика, намотанную на катушку. По мере передвижения ленты каждый фильтровальный диск оказывается на ее нижней поверхности плотно прижатым к вакуумной камере, прн этом растворимая фаза удаляется, а нерастворимая остается на фильтре, который после высушивания пропускают через счетчик для измерения радиоактивности.
Предыдущая << 1 .. 79 80 81 82 83 84 < 85 > 86 87 88 89 90 91 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed