Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
Многие вещества, анализируемые с помощью радиоимму-нологического метода, не обладают никакой биологической активностью в привычном смысле этого слова; примерами могут служить канцероэмбриональный антиген, а-фетопроте-ин и продукты расщепления фибрина. Более того, для большинства соединений этого типа не существует других методов их количественного определения в биологических жидкостях, а следовательно, по отношению к ним ничего нельзя сказать о возможности диссоциации биологической и иммунологической активностей. В этих случаях доказательство того, что радиоиммунологический метод позволяет определять именно то вещество, для которого он предназначен, а не ка-кое-либо родственное соединение, целиком зависит от возможности использования физико-химических методов типа применяемых для определения специфичности (см. разд. 9.3.5). Отсутствуе идентичности еще не означает, что анализ не имеет смысла. Так, например, основная масса материала, определяемого в сыворотке с помощью метода, предназначенного для анализа фрагмента Е (продукта концевой деградации фибрина и фибриногена), имеет больший молекулярный вес и представляет собой частично расщепленный фибриноген (рис. 11.5). Однако определение фрагмента Е очень удобно с технической точки зрения (доступность реагентов и их стабильность, специфичность по отношению к интактному фибриногену), в связи с чем использование этой системы обеспечивает ряд практических преимуществ.
11.5. Резюме
Идеальных методов анализа не существует, и различные типы методов могут отражать разные свойства одного и того же вещества. Поскольку каждый метод анализа в процессе его развития приходится сравнивать с другими методами, основным критерием должна быть его полезность. Нет никаких оснований отказываться от метода только потому, что он дает в два раза более высокие результаты, чем те, которые дают боле сложные методы анализа, при условии, что выбранный метод прост и высоко производителен. Эти качества всегда являлись существенным преимуществом радиоиммунологического метода анализа по сравнению с биологическими методами. Даже в том случае, если этот метод дает результаты, не совсем соответствующие истинным величинам, он все же представляет огромную ценность, поскольку с его помощью можно без особого труда определить, болен человек или нет.
АВТОМАТИЗАЦИЯ АНАЛИТИЧЕСКИХ ОПЕРАЦИЙ
12.1. Общие положения
Все методы связывания состоят из повторяющихся опера--ций добавления реагентов, перемешивания, разделения фаз и измерения радиоактивности в пробирках. С точки зрения творчества работа лаборанта, делающего массовые анализы, мало чем отличается от «изготовления почтовых мешков» (Bagshawe), и. для истинного исследователя такая работа безусловно не представляет никакого интереса. Дело, одиако, не только в том, что выполняемые вручную монотонные операции не могут нравиться лаборанту; значительно более важное значение имеет то обстоятельство, что бесконечное повторение одних и тех же операций может привести к потере точ-. ности анализа, а также то, что это трудоемко и, следовательно, дорого. Поэтому весьма желательна частичная или полная автоматизация аналитических операций. Конечная цель в данном случае такая же, как и при всякой автоматизации методов, используемых в клинической химии. Она состоит в том, чтобы идентифицированный образец мог быть помещен на один конец прибора, и через по возможности минимальный промежуток времени на другом конце прибора были бы отпечатаны в соответствующей форме результаты. Если бы такая цель была достигнута, то от оператора требовалось бы только введение реагентов и контроль за правильностью работы прибора.
В настоящее время не существует доступных для широкого использования и получивших общее признание приборов, позволяющих полностью автоматизировать аналитические операции. Однако в этом направлении ведется интенсивная работа (не только в больших коммерческих фирмах), и вполне возможно, что к моменту выхода настоящей книги окажутся доступными один или даже несколько приборов, которые будут отвечать требованиям полной автоматизации.
Основные характеристики автоматизированных систем удобнее всего рассматривать применительно к отдельным стадиям анализа: идентификации и отбиранию образца, добавлению реагентов, инкубации, разделению связанного и сво-
бодного лиганда, определению количества меченого лиганда, измерению радиоактивности и расчету результатов. Применительно к этим же стадиям будут рассматриваться полуавтоматические системы, которые уже получили широкое распространение.
12.2. Идентификация и отбирание образца
Существуют два способа идентификации образцов, полученных от пациентов, а именно: непрямой путь, состоящий в нумерации образцов и реакционных пробирок в фиксированной последовательности, и прямой путь, при котором на реакционных пробирках указывают те же сведения (фамилия больного и номер), которые имеются на пробирке с образцом. Оба способа идентификации применяются при ручном проведении анализа, однако они могут быть автоматизированы при помощи цифрового компьютера. Преимущество порядковой нумерации состоит в простоте и удобстве, а ее недостаток заключается в возможности серьезных ошибок при нумерации, а также в необходимости составления списка всех образцов. В случае полностью автоматизированных анализов этот список может представлять собой перфорированную ленту, которая заполняется по мере введения обрязиов и затем считывается при расчете результатов, осуществляемом либо в самой системе, либо вне ее. Важное преимущество прямого маркирования реакционных пробирок состоит в том, что оно почти полностью гарантирует от ошибок. Однако оно имеет тот недостаток, что при полностью автоматизированном анализе требуется очень сложная система шифровки каждой реакционной пробирки с помощью применяемого в данном компьютере кода.
