Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 83

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 77 78 79 80 81 82 < 83 > 84 85 86 87 88 89 .. 100 >> Следующая

Степень диссоциации биологической и иммунологической активностей гормона, очевидно, может быть совершенно разной в зависимости от природы исследуемой системы. В тех случаях, когда антигенный и функционально активный участки совпадают, диссоциация будет незначительной или ее воообще не будет. В тех случаях, когда эти участки не совпадают, степень диссоциации будет зависеть от относительных скоростей расщепления этих участков под действием гидролитического фермента. Если функционально активный участок расщепляется быстрее, то при иммунологическом анализе общее количество определяемого гормона будет завышено. Если же менее стабильным является антигенный участок, то данные, полученные иммунологическим методом, будут, занижены, однако практически такая ситуация встречается крайне редко.
Диссоциацию иммунологической и биологической активностей не всегда можио объяснить на основании разных скоростей расщепления соответствующих участков молекулы гормона. На рис. 11.3 приведен пример, который до сйх пор не Получил объяснения. В серийных образцах крови, собранных у женщин в течение менструального цикла, характер изменения концентрации ЛГ при определении биологическим и радиоиммунологическим методами был совершенно разным. В качестве возможного объяснения можно предположить существование двух разных форм Л Г или же присутствие в крови в середине цикла факторов, угнетающих биологическую активность и не влияющих на иммунологическую активность.
Хотя с точки зрения радиоиммунологического йётода диссоциацию биологической и иммунологической активностей ча-
S 10 15 ZO 25 30 мин
Рис. И.2. Исчезновение окситоцина из кровеносного русла. Гормон вво» доли внутривенно» после чего его со* держание определяли иммунологи-чески (/) и биологически (//).
Рис. 11.3. Определение содержания лютеиннзнрующего гормона в кровеносном русле женшнн в течение менструального цнкла. /—цитохимический анализ; II—иммунологический анализ. Обратите внимание иа несовпадение данных, полученных разными методами. (Данные любезно предоставлены д-ром Р. М. Крэмером.)
сто рассматривают как недостаток, тем не менее она может иметь и некоторые положительные стороны. В тех случаях, когда биологический материал крайне нестабилен или имеет в условиях in vivo очень короткий период полужизни, специфический анализ продуктов его метаболизма («следов») может оказаться не менее, а даже более ценным, чем определение количества исходного соединения. Наглядным примером может служить определение количества метаболита простаг-ландина 15-кето-ПГР2ее (Levine, Gutierrez-Cernosek, 1972).
Обычно вопрос о диссоциации биологической и иммунологической активностей обсуждается в связи с гормонами, однако он может касаться и других веществ. Классический метод количественного определения ферментов сводится к определению их биологической активности, о которой судят по скорости превращения субстрата в продукт реакции. При таком определении активность часто бывает обусловлена целым рядом факторов и зависит как от конкретных условий, в которых проводится анализ, так и от возможности реализации этой активности только в присутствии нескольких ферментов. Были описаны радиоиммунологические методы анализа некоторых ферментов (например, плацентарной щелочной фосфа-тазы; см. Jacoby, Bagshawe, 1972). Если эти методы отвечают общепринятым критериям чистоты антигена и специфичности
•л
0 л
то'

1 О'
• oj
/ О 1
* лТет^шИ 1 Ферменты обладаютразм& стру/Р
Внехле 0 то?Шй
\ турой, т ябина/гевой аггтивяостш
Рнс. 11.4. Рисунок демонстрирует преимущество иммунологической активности по сравнению с биологической для аналитических целей. Например, существуют две формы фермента—виутриклеточиан и внеклеточная. Они могут быть различны по своей химической структура, но идентичны функционально. Классическими методами это установить невозможно. Иммунологический анализ позволяет идентифицировать именно структуру и таким образом дает в руки чувствительный метод обнаружения внутриклеточного фермента в кровотоке в случае повреждения клеток.
Свободный объем
тоге// FgDft
^П/^эшоген
JO
10
Лервд операцией
4Y-
4V-
Яорргальяа*
сыворотла
60
90 JZO Объем, лил
150 J80
Рис. 11.5. Результаты радиоиммунологического анализа FgE» продукта концевой деградации фибриногена» во фракцннх человеческой сыворотки после гель*хроматогра« фни. Обратите внимание» что как в норме» так и в патологии основная часть материала элюируется раньше собственно фибриногена, т. е. имеет больший молекулярный вес и, следовательно, не нвляется FgE.
антисыворотки, то оии должны давать абсолютную концентрацию фермента независимо от любых факторов, способных влиять на его активность. С точки зрения клинической практики возможность определять «массу фермента» представляется чрезвычайно заманчивой: для диагностических целей, в отличие от научных, определение функциональной активности является лишь средством, при помощи которого обнаруживают появление фермента в крови, обусловленное повреждением клеток (Landon et al., 1977). Радиоиммунологический метод анализа позволяет это делать прямым путем, а кроме того, открывает интересную возможность раздельного определения внутриклеточных ферментов и ферментов, присутствующих в крови и обладающих такой же активностью, но имеющих другое строение; специфическое определение внутриклеточных ферментов в крови могло бы быть значительно более чувствительным показателем повреждения, поскольку в норме они вообще не должны присутствовать в крови (рис. 11.4). Другим примером такого подхода является определение содержания миоглобина в крови для диагностики инфаркта миокарда (Kagen et al., 1975).
Предыдущая << 1 .. 77 78 79 80 81 82 < 83 > 84 85 86 87 88 89 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed