Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 82

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 76 77 78 79 80 81 < 82 > 83 84 85 86 87 88 .. 100 >> Следующая

11.3. Методы анализа, основанные на использовании связывающих белксв плазмы
Использование связывающего белка плазмы, являющего* ся природным материалом, можно рассматривать в какой-то
степени как продолжение рецепторного метода анализа. Однако с функциональной точки зрения эти два метода совершенно различны. Биологическая активность молекулы практически не зависит от того, каким путем она доставляется к активному участку рецептора, и отражением этого обстоятельства является тот факт, что по своей специфичности связывающие агенты плазмы очень сильно отличаются от клеточных рецепторов. В связи с этим методы анализа,основанные на использовании связывающих белков плазмы, нельзя считать вариантами биологических методов. Эти методы не следует путать с методами количественного определения самих связывающих белков плазмы, которые являются истинно биологическими методами, поскольку в их основе действительно лежит процесс связывания лиганда.
Взаимоотношения данного типа анализа с другими следует рассматривать исходя из сказанного с точки зрения специфичности. Вопрос о специфичности уже обсуждался (см. разд. 4.4). Связывающие белки плазмы обладают, как правило, групповой специфичностью; так, например, глобулин, связывающий половые гормоны, связывает как эстрогены, так и андрогены. Столь широкая специфичность методов анализа, основанных на использовании связывающих белков плазмы (по сравнению с радиоиммунологическим методом анализа), почти всегда требует предварительной экстракции вещества из биологической жидкости и его очистки, и это обстоятельство наряду с трудностями получения белков плазмы ограничивает практическое использование этого метода.
11.4. Иммунологические методы анализа
При огромных практических успехах иммунологических методов анализа (в особенности радиоиммунологического метода анализа) их часто критикуют за то, что они не дают информации о функциональной активности лиганда. Критика эта, несомненно, справедлива. Поскольку участок молекулы лиганда, связывающийся с антителом, как правило, значительно меньше по размеру, чем вся молекула, для анализа которой предназначен данный метод, в действительности можно измерить лишь количество этих участков, которые могут вовсе не совпадать с той областью молекулы, которая отвечает за ее биологическую активность (рис. 11.1). В связи с этим возможна ситуация, когда с помощью радиоиммунологического метода анализа будут определяться не только ин-тактные молекулы, но и неактивные фрагменты и содержание интактных молекул будет завышено. Подобное явление обыч-
активный yvacmwc
Ан/77аге////б/и yi/ашок
Рис. 11.1. Диссоциация иммунологической и биологической активностей. После расщеп* лення молекулы функциональный центр исчез, тогда как аналитический центр сохранился ннтактньш.
но называют диссоциацией иммунологической и биологической активностей
Несколько таких случаев было изучено достаточно хорошо. Наиболее известным примером может служить АКТГ. Молекула АКТГ содержит 39 аминокислотных остатков; фрагмент, состоящий из первых 24 аминокислот, отвечает за биологическую активность и у многих видов животных имеет сходный аминокислотный состав, тогда как фрагмент, в который входят остатки с 25-го по 39-й, не обладает биологической активностью, и его аминокислотный состав характеризуется высокой видовой специфичностью. Антисыворотка, полученная при иммунизации интактными молекулами АКТГ, бывает, как правило, специфична к биологически неактивному С-концево-му фрагменту молекулы, в связи с чем при ее использовании могут определяться не только активные молекулы АКТГ, но и неактивные фрагменты, образующиеся при его распаде in vivo. Практически эту проблему удалось частично решить, применяя антисыворотку, полученную при иммунизации синтетическим фрагментом 1—24 в качестве антигена (Synacthen, Ciha). При использовании такой антисыворотки и меченого фрагмента 1—24 анализ АКТГ дает результаты, сходные с тем, что получается при помощи биологического метода анализа (Rees et al., 1973).
Другим примером может служить небольшой пептидный гормон окситоцин. Основная часть моЛекулы окситоцина представляет собой кольцо, замкнутое дисульфидным мостиком; эта кольцевая структура абсолютно необходима для биологической активности молекулы; при разрушении кольцевой структуры в любой ее точке биологическая активность окси-тоцина полностью исчезает. Иммунологическая активность, напротив, сохраняется независимо от наличия или отсутствия кольцевой структуры, но постепенно уменьшается по мере
1 По существу здесь речь идет о несовпаденви результатов определения концентрацвв лиганда разными методами, а вменно методом, основанным на оценке его биологической (функциональной) активности, и методом рэдвоиммунологвческого анчдиза- — Примечание редактора.
отщепления аминокислот. Если окситоцин инкубировать с плазмой, полученной от женщин на поздних стадиях беременности и содержащей фермент окситоциназу, то при анализе биологическим методом скорость расщепления окситоцина оказывается выше, чем при анализе радиоиммунологическим методом (James et al., 1971). Аналогичное явление наблюдается при инфузии окситоцина in vivo, хотя в этом случае главным фактором, приводящим к разрушению окситоцина, является его метаболизм в печени и почках (рис. 11.2).
Предыдущая << 1 .. 76 77 78 79 80 81 < 82 > 83 84 85 86 87 88 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed