Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
5) Расхождение между параллельными определениями. Существует хорошее правило, согласно которому устанавливают верхний предел различий для параллельных определений, а если какие-то величины выходят за этот предел, то их отбрасывают и анализ образца повторяют. Обычно этот предел составляет 5% от общего числа импульсов в системе. Основная цель такого контроля состоит в том, чтобы исключить грубую ошибку, связанную с ошибкой пипетирования или измерения радиоактивности. Тот факт, что такие ошибки встречаются не так уж редко как при ручном, так и при полуавтоматическом проведении анализа, лишний раз доказывает необходимость параллельных определений для каждого образца, стандарта и пула контроля качестйа.
6) Средний результат анализа. Средняя величина, полученная путем усреднения результатов всех анализов, может быть использована в качестве параметра контроля качества.
Такой подход возможен в том случае, если характер анализируемых образцов в каждом анализе будет сходным, т. е. все они будут содержать одинаковое число высоких, средних и нормальных величин. Это условие выполнимо только при относительно большом числе образцов, анализируемых в каждой серии; при небольшом числе образцов (не более 50) этот параметр является нестабильным и не пригоден для контроля качества. В качестве альтернативы можно было бы использовать среднюю величину для ограниченной популяции, когда образцы для анализа подбираются на основании критериев, дающих гомогенную популяцию. Практически проведение такого анализа заняло бы, вероятно, много времени и потребовало бы таких сведений о больных, кото-рыми лаборатория обычно не располагает.
10.4. Пути оптимизации точности анализа
Пути оптимизации точности анализа должны быть основаны главным образом на учете тех факторов, которые, как уже указывалось выше, влияют на точность. Некоторые положения следует, однако, подчеркнуть еще раз. Во-первых, речь идет о проверке точности путем контроля качества, сущность которой состоит в том, что при проведении каждого анализа в состав проб включают аликвоты соответствующего пула. Без контроля качества нельзя проводить анализ, поскольку в этом случае оператор не может судить о достоверности получаемых результатов. Во-вторых,. необходимо учитывать важность наличия хорошей методики анализа, без которой даже самый опытный лаборант не сможет получить хороших результатов независимо от числа и диапазона параметров, используемых для контроля качества. И наконец, в-третьих, необходимо подчеркнуть важное значение правильного обучения оператора, благодаря чему простые технические ошибки могут быть сведены к минимуму. Как отмечается в одной из глав этой книги, автоматика в какой-то степени позволяет заменить оператора, но никогда не сможет заменить его полностью.
ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА СВЯЗЫВАНИЯ: ВЗАИМОСВЯЗЬ С ДРУГИМИ ВИДАМИ АНАЛИЗА
11.1. Определение
Идеальный метод количественного определения вещества в биологической жидкости должен был бы состоять в экстракции этого вещества со 100%-ным выходом и 100%-ной чистотой и в последующем взвешивании его на абсолютно точных весах. В этом случае полученный результат представлял бы истинную концентрацию вещества, рассчитанную как отношение веса к объему, а при известном молекулярном весе вещества его содержание можно было бы выразить также в виде молярной концентрации.
Ни один из известных методов анализа даже не приближается к такой степени совершенства. В действительности вся аналитическая работа состоит из серии компромиссов и дает результаты, которые могут лишь приближаться к истинным величинам, но никогда ие являются абсолютно правильными. В конечном счете основным критерием является практическая ценность данного метода, т. е. ценность получаемых результатов с точки зрения тех биологических или клинических задач, для решения которых ои предназначен. Именно этот критерий помогает аналитикам избавиться от представления, согласно которому какой-то одни метод в принципе может намного превосходить другие. В частности, он освобождает многих специалистов, анализирующих гормоны при помощи радиоиммунологического метода, от ощущения неполноценности этого метода по сравнению с биологическим методом анализа, хотя в действительности последний может давать совершенно неверные результаты в связи с присутствием в биологических жидкостях сходных по биологической активности, ио часто неидентифицируемых веществ.
В этой главе будет рассмотрена взаимосвязь между ме* тодами связывания и другими видами анализа. При этом мы постараемся избежать предвзятого представления, согласно которому тот или иной .метод обладает исключительными, только ему присущими достоинствами. Удобно обсуждать методы, разделив их иа группы, в зависимости от природы используемых в них связывающих агентов,
11.2. Рецепторный метод анализа
Методы анализа, в которых в качестве связывающих агентов используются рецепторные белки (см. разд. 4.3), были встречены с большим энтузиазмом, поскольку считалось, что они очень близки к биологическим методам анализа. Интуитивно эта точка зрения казалась верной, хотя лишь в редких случаях она была подтверждена экспериментальным путем. Однако по поводу сходства рецепторных методов анализа с биологическими необходимо сделать ряд замечаний, оставляя пока в стороне вопрос о практической ценности рецепторных методов, которая не так уж велика, хотя и не меньше, чем у большинства истинно биологических методов анализа. Первое замечание касается того факта, что, по-видимому, ие все рецепторы имеют отношение к биологической активности (Birnbaumer, Pohl, 1973). Второе замечание состоит в том, что существуют рецепторы, которые невозможно связать с известными типами биологической активности данного агента; примером могут служить рецепторы к оксито-цину, выделенные из жировых клеток. Согласно третьему заг мечанию, существует возможность того, что рецептор будет связывать фрагменты молекул, не обладающие биологической активностью, как, например, в тех случаях, когда уча-сток интактнон молекулы может связываться с рецептором, но для проявления функциональной активности необходимы кооперативные взаимодействия между этим участком и остальными частями молекулы. Четвертое замечание состоит в том, что рецептор может быть лишен способности связывать крупную молекулу прогормона, тогда как с физиологической точки зрения определение количества прогормона не менее важно, чем определение количества активной молекулы. И наконец, пятое замечание касается того, что при помощи рецепторов практически нельзя определять количество метаболитов интактиой молекулы, хотя эти метаболиты (такие, например, как комплексы, содержащие в своем составе стероиды) могут иметь немалое практическое значение. Все перечисленные замечания дают основания считать, что методы анализа, основанные на использовании клеточных рецепторов, в принципе далеко не всегда обладают существенными преимуществами по сравнению с методами, в которых используются другие виды связывающих агентов.
