Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
С практической точки зрения значительно более важным показателем является коэффициент, характеризующий разброс результатов анализа разных серий. Для определения этого показателя при каждом проведении анализа в состав проб включают аликвоты пула контроля качества. С этой целью пул анализируют как одни образец; например, если все образцы анализируются как две параллельные пробы, то аликвоты пула также должны анализироваться в двух пробирках. Использование большего числа параллельных проб создает лишь видимость точности. Проделав достаточно
/йгмо лрооеЯетый Smb/a7 лула слизхоИ, анализ яонц&нпрвцией
\
I
1
!
I
JfaMej7 анализа
Рис. 10.5. Контроль качества при стандартном радноиммуиологнческом анализе плацентарного лактогена человека. На графике показаны серийные значения для пулов с высокой и низкой концентрацией ПЛЧ. а также средние значения и доверительные интервалы для этцх пулов, рассчитанные на основании результатов всех анализов. При плохом качестве одного из анализов полученные значения для обоих пулов были значительно меньше среднего значения, н все результаты анализа были отброшены. После замены пула» имеющего низкую концентрацию ПЛЧ» получаемые для этого нула величины заметно снизились. Однако в связи с тем, что для иула с высокой концентрацией результаты не изменились, было сделано предположение, что указанное снижение отрзжает истинное уменьшение концентрации ПЛЧ, а ие плохое качество анализа.
большое число последовательных анализов, полученные для пула результаты выражают при помощи одного из следующих способов.
1) В виде коэффициента разброса, рассчитанного по описанному выше методу. Для большинства систем коэффициент разброса будет составлять 8—20%; эта величина должна быть определена на основании большого числа анализов, проводившихся разными операторами, причем во время проведения анализов несколько раз должны меняться партии всех основных реагентов (антител, меченого лиганда, стан* дартов и агентов, применяемых для разделения). Часто уда« ется получить более низкий коэффициент разброса, однако это бывает лишь в тех случаях, когда все анализы проводятся одним и тем же оператором с одной партией реагентов, и это обстоятельство необходимо учитывать при определении реальной ценности такого определения^
и
$ § II |§
б J0 14
Номер анализа
Рис. 10.6. Контроль качества прн раднонммунологнческои анализе плацентарного лактогена человека. На нижнем графике приведены серийные велнчннм, а на верхием-график кумулятивной суммы (накапливаемая алгебраическая сумма отклонений от средней величины). Заметим, что такой график более чувствителен к изменению условий, чем график серийных величин.
2) В виде графика, на который наносятся все полученные для пула величины (рис. 10.5). Такой график хорошо иметь в каждой лаборатории, тем более что его очень легко составить и им удобно пользоваться. График оказывается особенно полезным, если на нем указаны также пределы колебаний для контрольного пула в виде средней величины и коэффициента разброса. График следует поместить на видном месте, чтобы его могли легко видеть все, кто имеет отношение к проведению анализов. Он не только позволяет обнаружить плохое качество анализа, но в случае изменения величин при замене пула помогает решить вопрос о том, отражает ли это изменение. отклонения в проведении всего анализа в целом (рис. 10.5).
3) В виде графика кумулятивной суммы (рис. 10.6). Такой график выражает зависимость накапливаемой алгебраической суммы отклонений серийных значений от средней величины в процессе увеличения числа анализов. Хотя такой график труднее построить, чем простой график серийных величин, однако во многих отношениях он является более ин-> формативным, поскольку со всей очевидностью указывает на незначительное, но систематическое отклонение в результатах анализа.
10.3.3. Другие способы проверки точности
Наиболее важным показателем точности анализа служит коэффициент, характеризующий разброс результатов анализа образцов разных серий, полученный при использовании пула контроля качества. Существует, однако, множество других параметров, которые в разной степени отражают точность и должны определяться при каждом анализе. К ним относятся:
1) Общий счет радиоактивности. Вопрос об измерении радиоактивности и об ошибках счета рассматривается в разд. 10.2.1.6.
2) Величина холостой пробы. Следует всегда обращать внимание на величины холостой пробы и нулевого стандарта, и если они выходят за пределы, найденные в предыдущих анализах, то, прежде чем работать далее, необходимо найти ошибку. Чаще всего причиной отклонения является использование слишком долго хранившегося меченого лиганда, что приводит во многих системах к снижению величины нулевого стандарта и одновременно к повышению величины холостой пробы.
3) Эффективная доза стандарта, при которой угнетение связывания составляет 50%.
4) Наклон калибровочной кривой. Определение этого параметра целесообразно проводить только в том случае, если кривая преобразована в прямую линию (например, с помощью рассмотренного в разд. 7.2 logit-преобразования). Получаемая в этом случае информация сходна с той, которую дает холостая проба, а именно если уменьшается величина нулевого стандарта и (или) повышается величина холостой пробы, то степень наклона уменьшается.
