Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 71

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 65 66 67 68 69 70 < 71 > 72 73 74 75 76 77 .. 100 >> Следующая

Расчеты в случае непараллельности кривых. Если кривые, полученные для стандарта и перекрестно-реагирующего материала, не параллельны, то ясно, что расчет активности, основанный на 50%-ном угнетении связывания, даст совершенно иной результат, чем расчет, исходящий из 10%-ного угнетения (см. рис. 9.2). Простого решения этой проблемы не существует, в связи с чем значение перекрестной реакции, при-
водящей к отсутствию параллельности, приходится оценивать, исходя из предполагаемого биологического или клинического применения метода. В связи с этим возникает вопрос, как идентифицировать параллельность. При решении этого вопроса обычно приходится руководствоваться субъективным впечатлением, которое может быть, однако, весьма ошибочным, особенно для крайних участков калибровочной кривой. Существуют два подхода к решению этой проблемы. Первый включает logit-преобразование полученных данных (см. разд. 7.2) с последующей статистической обработкой обеих линейных регрессий. Второй прием заключается в том, что для каждого разведения рассчитывают кажущуюся активность, а затем исследуют полученные значения на наличие систематического расхождения между ними для стандарта и перекрестно-реагирующего материала. При идентификации параллельности важно также исключить экспериментальный артефакт, который может возникнуть при получении серии растворов известной концентрации в результате разбавления исходного стандартного раствора; действительно, как показывает опыт, сравнение двух серий стандартных растворов, одна из которых получена разбавлением, а другая независимым приготовлением каждого раствора, почти всегда обнаруживает некоторую непараллельность (см. разд. 2.5).
Связь с клиническими и физиологическими ситуациями. Очевидно, что значение вредного влияния вещества, дающего перекрестную реакцию, определяется в конечном счете тем, в какой степени это влияние мешает практическому проведению анализа. Лучше всего это положение может быть проиллюстрировано на примере двух крайних случаев. При анализе тироксина (Т4) с помощью радиоиммунологического метода присутствие трииодтиронина (Т3) дает значительную перекрестную реакцию (10% и даже больше); однако эта перекрестная реакция не имеет практического значения, поскольку концентрация Т3 в крови по крайней мере на два порядка ниже концентрации Т4. С другой стороны, в радиоиммунологическом методе анализа Т3 перекрестная реакция для Т4 составляет всего 1%, однако по указанной выше причине влияние этой реакции может быть очень большим и при использовании такого метода присутствующий в крови Т« может составлять значительную долю от определяемого Т3.
Выбор веществ для исследования перекрестной реакции. Очевидно, что в используемом методе анализа практически нереально проверить на перекрестную реакцию все возможные вещества биологического происхождения. Поэтому обычно ограничиваются тем, что проверяют только те вещества, которые действительно могут содержаться в анализируемых растворах и, судя по их физико-химическцм свойствам, могут
давать перекрестную реакцию. В случае стероидных гормонов выбор таких вешеств относительно прост, поскольку и структурные различия, и соотношение их концентраций хорошо известны. Более того, такой проверке доступен широкий круг высокоочшценных соединений. Аналогичная ситуация имеет место в случае небольших пептидов. В случае же высокомолекулярных белков отбор веществ и интерпретация результатов представляют собой гораздо более трудную задачу. Высокоочищенные белковые препараты, как правило, дефицитны, а для проверки перекрестной реакции на уровне 1 и 0,1% требуются сравнительно большие их количества. Вместе с тем использование неочищенного материала может приводить к недоразумениям, поскольку в таком материале могут содержаться близкие по структуре белки, которые не обнаруживаются при проверке чистоты другими методами анализа, но тем не менее способны давать перекрестную реакцию и искажать тем самым результат анализа. Хорошим примером такой ситуации может служить количественное определение плацентарных и гипофизарных гликопротеидных гормонов, при котором могут наблюдаться весьма значительные расхождения результатов, получаемых радиоиммунологическим и биологическим методами анализа (см. разд. 11.4). Наконец, при анализе некоторых уникальных (или кажущихся такими) веществ биологического происхождения нет возможности проводить отбор веществ для определения специфичности в соответствии с какими-либо логическими соображениями: в такой ситуации специфичность анализа должна зависеть от физико-химических свойств соединения, а также от его поведения в различных физиологических условиях.
9.2.3. Методы поеышония специфичности
При использовании природных связывающих агентов (белки крови или клеточные рецепторы) единственным способом повышения специфичности является проведение пред-варительной экстракции, методы которой были описаны выше (разд. 6.2). При использовании антител, напротив, благодаря вариабельности и гетерогенности первичного реагента существует много возможностей для прямого повышения
Предыдущая << 1 .. 65 66 67 68 69 70 < 71 > 72 73 74 75 76 77 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed