Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 53

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 47 48 49 50 51 52 < 53 > 54 55 56 57 58 59 .. 100 >> Следующая

Можно с уверенностью сказать, что число применяемых методов разделения в каждой лаборатории имеет смысл свести к минимуму. Очевидно, что лучше располагать двумя или тремя универсальными методами, характеристики кото-рых хорошо известны, а реагенты вполне доступны, чем мно-жеством различных методов, каждый из которых имеет при-сущие ему недостатки. Для использования в радиоиммуно-логическом методе анализа следует рекомендовать два способа, которые лучше остальных выдержали проверку временем, а именно методы химического осаждения и метод двойных антител. Исследователю, приступающему к разработке нового радиоиммунологического метода анализа и располагающему необходимыми основными реагентами, можно рекомендовать при выборе метода осаждения испытать вначале простую систему, например полиэтиленгликоль (см. табл. 5.4). Если такую систему по рассмотренным выше причинам использовать нельзя, то следует попытаться применить метод двойных антител (см. табл. 5.4). Собственный опыт автора позволяет считать, что не существует такого метода анализа, для которого не подошел бы один из этих способов.
Несмотря ни на какие аргументы общего характера, никогда не следует верить тому, что тот или иной способ разделения является совершенным и обеспечивает полное разделение свободного и связанного лиганда. Более того, никогда нельзя быть уверенным в том, что с точки зрения возможностей методы разделения различаются только по эффективности. Если два метода разделения дают одинаковые величины холостой пробы и нулевого стандарта, то это еще не означает, что состав проб в обоих случаях является одинаковым: так, например, в одном случае холостая проба может состоять из поврежденного меченого лиганда, а в другом случае будет содержать интактный меченый лиганд, выпадение которого в осадок обусловлено совпадением характеристик свободного и связанного лиганда. Такое различие может привести к резкому расхождению результатов, получаемых двумя методами. Наконец, следует еще раз подчеркнуть, что ре-
зультаты, получаемые при использовании того или другого способа разделения, почти наверняка могут варьировать в зависимости от среды, в которой проводится анализ (а именно в сыворотке, плазме или моче). Стандарты, приготовленные в буферном растворе, обычно не идентичны анализируемым образцам, представляющим собой сыворотку, и есть основания считать, что это отсутствие идентичности объясняется артефактом метода разделения. Единственный путь решения этой проблемы состоит в том, чтобы готовить все стандартные растворы в среде, по возможности близкой к анализируемому образцу, в тех случаях, когда это возможно, такой средой может быть, например, плазма, не содержащая гормона (см. разд. 9.3.5).
5.4. Иммунорадиометрические методы анализа
Изящный иммунорадиометрический метод анализа (Miles, Hales, 1968; Woodhead et al., 1974) рассматривается в настоящей главе потому, что он представляет собой важный вариант, в котором проводится разделение не связанного и свободного лиганда, а связанного и свободного связывающего агента. Внимательное рассмотрение основных уравнений, описывающих системы связывания (см. разд. 1.4), показывает, что между этими дбумя возможностями нет принципиального различия, поскольку отличие связывающего агента от лиганда является скорее условным, чем реальным; основная логика системы не изменится, если поменять местами названия связывающего агента и лиганда. Вместе с тем им-мунорадиометрическйй метод анализа обладает рядом практических преимуществ, благодаря которым он представляет большой интерес, хотя редко применяется на практике.
Типичный метод иммунорадиометрического анализа схематически представлен на рис. 5.10. В качестве предварительного этапа проводится выделение специфичных по отношению к лиганду антител путем их экстракции из антисыворотки при помощи иммуносорбента, который получают, присоединяя вы-сокоочищенный антиген к твердофазному носителю типа целлюлозы или сефарозы. Антисыворотку перемешивают с иммуносорбентом и спустя определенный промежуток времени (достаточный для установления равновесия) сыворотку удаляют; при этом остаются только специфические антитела, связанные с иммуносорбентом. В иммунорадиометрическом методе анализа, так же как в других твердофазных системах (см. выше), на каждой стадии приходится проводить тщательное промывание для полного удаления растворимого материала. Связанные с твердофазным носителем антитела
5 Т. Чард
Уинсулт'р jj At cf^
|Инсулин % At Cf^
gire-^
Мммуносорбент \ Инсут/н ^
J7ереме- / 45мин шивание' I 4°c
J/e0oc<rdovHasr j
жи /госте, Центрифугирование
\Йнсулин^ Аг СГ П
?u\
Иммуносорбент {Инсулин^ At
Ряс. 6.10. Иммунорадиометрнческнй метод анализа Майлса и Хейлса. Специфичное по отношению к инсулину очищенное антитело, меченное изотопом |ttI, инкубируют с образцом или стандартом. Затем свободное антитело отделяют, добавляя инсулин* иммобилизованный на твердофазном носителе. Чем больше количество инсулина в образце или в нробе со стандартом» тем меньше будет количество антитела, связанного с твердофазным носителем.
Предыдущая << 1 .. 47 48 49 50 51 52 < 53 > 54 55 56 57 58 59 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed