Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
9. Иммунизацию более крупных животных (овец, коз) можно проводить по такой же схеме, однако при этом следует в 2—3 раза увеличить количество иммуногена
Примечание. Если при использовании «легкого» иммуиогена какое-то животное
при повторной проверке вообще ие дает иммунного ответа или дает плохой ответ, это
животное следует исключить нз группы. Следует отметить, что при иммунизации некоторыми гаптеиами иммунный ответ удается получить лишь через миого месяцев.
произвольно, поскольку существует почти столько же разных схем иммунизации, сколько специалистов работает в области радиоиммунологического анализа. С другими схемами иммунизации читатель может познакомиться в работе Клаузена, опубликованной в томе .1 настоящей серии. В принципе подобная ситуация отражает тот факт, что одна и та же конечная цель может быть достигнута разными путями. На практике очень трудно бывает доказать, что та или иная схема лучше остальных, поскольку в связи с большой вариабельностью иммунного ответа для этого потребовались бы большие группы животных и соответствующие контрольные определения. Литература переполнена сообщениями о создании той или иной исключительно эффективной схемы иммунизации, но в подтверждение нередко приводятся данные, которые в руках других исследователей не воспроизводятся.
Процесс иммунизации еще не изучен окончательно, но уже сейчас можно говорить о некоторых специфических факторах, от которых зависит успех схемы иммунизации. К этим факторам относятся природа и доза иммуногена, использование адъюванта, вид взятых для иммунизации животных, способ иммунизации, порядок и время введения антигена и сбора антисыворотки.
4.2.7. Природа и дова иммуногена
Иммуногенность1 материала находится, как правило, в прямой зависимости от его молекулярного веса. Вещества с молекулярным весом более 5000 являются обычно хорошими иммуногенами; если, например, группе из шести кроликов ввести с адъювантом плацентарный лактоген человека (мол. вес 20000) или а-фетопротеин (мол. вес 60000—70 000), то большинство животных даст иммунный ответ, и по меньшей мере от двух из них удастся получить антисыворотку, которую можно использовать при радиоиммунологическом анализе.
Однако при решении вопроса о пригодности антисыворотки необходимо исходить из специфических задач анализа. Если требуется очень высокая чувствительность и, следовательно, необходима антисыворотка с исключительно высоким сродством, то вероятность успеха будет значительно меньше. В отличие от реакции на крупные молекулы иммунный ответ на такие небольшие пептиды, как АКТГ (мол. вес. 4500) или гормоны задней доли гипофиза (мол. вес. 1000), часто бывает слабым, в связи с чем для нахождения эффективной антисыворотки приходится иммунизировать большое число животных и проводить частые тестирования. Вещества с молекулярным весом менее 800 (например, стероидные гормоны) вообще не являются иммуногенными, однако становятся таковыми после присоединения в качестве гаптенов к более крупным молекулам типа альбумина (см. разд. 4.2.8). Антисыворотки, получаемые при этом, обладают таким же сродством, как и вещества, обладающие собственной иммуногенностью. К числу факторов, усиливающих ответ на конъюгат, относятся высокая плотность молекул гаптена на молекуле носителя и использование носителей, обладающих собственной иммуногенностью. По пока непонятным причинам иммунизация небольшими пептидными гормонами, связанными с высокомолекулярными белками, оказывается ненамного более успеш-
1 Необходимо отличать понятие «иммуногеи» от понятия «антиген». Иммуиогеном называется вещестио, стимулирующее иммунный ответ, тогда как антиген представляет собой вещество, способное реагировать с антителами, но само по себе не всегда обладающее иммуногенностью (к антигенам относится, например, большинстио гаптенов).
ной, чем иммунизация одними только пептидами. Имеются данные, согласно которым адсорбция ангиотензина (Boyd et al., 1967) или окситоцина (Chard et al., 1970) на частицах угля повышает иммуногенность этих пептидов, однако надежных доказательств правильности этих данных получено не было.
Простой зависимости иммунной реакции от количества вводимого иммуногена не существует, в связи с чем доза вводимого иммуногена может колебаться в очень широких пределах. Большинство исследователей используют дозы в интервале 50—100 мкг, хотя эффективными могут быть и значительно меньшие дозы. Иллюстрацией может служить часто наблюдаемое образование неспецифических антител к примесям, составляющим не более 10% вещества, используемого для иммунизации. С другой стороны, слишком большие дозы (более 1 мг) могут вызывать у животного-реципиента явление толерантности, в результате чего оно не будет отвечать на данную и последующие инъекции иммуногена.
Часто можно слышать, что менее чистый материал обладает большей иммуногенностью, чем высокоочщцённый, причем это объясняют тем, что загрязнения действуют как адъюванты. В подтверждение этой точки зрения приводят, однако, малоубедительные доказательства. Хотя специфичность связывающего агента не является обязательным условием для создания специфического метода анализа, тем не менее она весьма желательна. Считается общим правилом, что если чистое вещество доступно в достаточных количествах, то для иммунизации следует применять именно его. Это особенно справедливо в случае иммунизации синтетическими соединениями, поскольку эти соединения могут содержать загрязнения, близкие по структуре к чистому антигену.
