Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 14

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 100 >> Следующая

Для нлюстрацнн последнего положения рассмотрим следующий гипотетический пример. Экспериментальные данные позволяют предположить, что в гипофизе присутствует неизвестный до сего времени гормон. Существует биологический метод количественного определения этого гормона, однако данный метод недостаточно чувствителен, в связи с чем с его помощью можно определять содержание гормона в гнпофи-
зарных экстрактах, но не в периферических жидкостях, например в крови. Химическая очистка нового гормона проведена до стадии, на которой полученный продукт содержит 10% гормона и 90% неспецифических примесей. Возникает вопрос: можно ли в данном случае разработать радиоиммуно-логический метод анализа, который облегчил бы дальнейшую очистку гормона и установление его физиологической роли in vivo?
Прежде всего необходимо провести иммунизацию животных антигеном для получения антисыворотки (см. гл. 4 и табл. 4.1). Последняя неизбежно будет содержать большое число антител, специфичных как по отношению к гормону, так и к Примесям. Более того, благодаря капризам иммунизации, содержание специфических антител не будет равно точно 10%, но может составлять, допустим, 1 и 30%- Следовательно» наличие такой антисыворотки не поможет наладить специфический метод анализа. Следующим этапом должно быть приготовление изотопно меченного гормона. В данном случае такой операцией является обычно иодирование антигена. Однако очевидно, что изотопная метка будет распределяться в процессе маркировки между всеми молекулами, и всего лишь 10% ее придется на специфический гормон. Хотя разделение связанного и несвязанного гормона не вызовет затруднений, поскольку здесь может быть использован универсальный метод двойных антител, тем не менее последний опять-таки не сможет обеспечить специфичность анализа. Использование полуочищенного антигена в качестве стандарта также ие может достигнуть полной специфичности. Как возможный обходной путь можно было бы использовать в качестве стандарта различные разведения плазмы с высоким содержанием гормона. Однако такому подходу мешают два обстоятельства. Первое из них состоит в том, что если физиология и патофизиология гормона изучены недостаточно, то неизвестно, в каких условиях следует собирать плазму, а второе в том, что даже при высоком содержании гормона в образце, он все равно ие будет вызывать в рассматриваемой системе достаточно сильных изменений соотношения между связанным и свободным лигандом.
Из рассмотренного примера следует, что отсутствие очищенного антигена в принципе не позволяет разработать ра-диоиммунологический метод анализа, который был бы пригоден для практического применения. Дело, однако, обстоит иначе, если доступно хотя бы небольшое количество высоко-очищенного лиганда. В этом случае можно было бы использовать для иммунизации чистый антиген и получить высокоспецифичную антисыворотку. При использовании же смешанной метки от такой антисыворотки было бы мало пользы, по-
скольку общее связывание в этих условиях не превышало бы 10%. Однако сочетание этой антисыворотки с меткой, приготовленной из ^истого антигена, дало бы специфичную систему, и в этом случае чистота стандарта не имела бы большого значения. Так, например, если стандарт представляет собой полу-очищенный антиген, то с его помощью можно получить полную калибровочную кривую и сравнивать с ней величины, найденные для исследуемых образцов. Хотя при этом результаты нельзя будет выразить количественно в весовых единицах, поскольку процентное содержание чистого гормона в частично очищенном препарате часто бывает неизвестно, тем не менее результаты могут быть охарактеризованы через какое-нибудь другое свойство полуочищенного антигена, например через его биологическую активность или через его количество в ампулах, в которых он распространяется в качестве международного стандарта. Примером практического применения полуочищенного антигена в качестве стандарта в сочетании с более специфическими компонентами в случае гонадотропинов могут служить лютеинизирующий гормон и фолликулостимулирующий гормон.
Описанная выше модель является чисто гипотетической, но если вместо слова «гормон» написать «пролактин человека», тогда те, кто работают в этой специальной области, сразу вспомнят очень похожий случай. До сравнительно недавнего времени существование в организме человека пролактина в качестве самостоятельной молекулы вызывало большие сомнения, и его физиология, естественно, оставалась неизученной. Вследствие близкого сходства физико-химических свойств пролактина и гормона роста первые попытки очистить пролактин оказались неудачными, и многие препараты пролактина, считавшиеся хорошими, на самом деле оказывались препаратами СТГ, свойства которого были слегка изменены в процессе очистки. В конце концов удалось получить небольшие количества чистого пролактина, не загрязненного ростовым гормоном (Hwang et al., 1971). Использование этого препарата в качестве метки в сочетании с антисывороткой, полученной по отношению к неочищенному СТГ (т. е. содержащей антитела к пролактину, который присутствовал в препарате СТГ в качестве примеси), позволило создать специфический метод ко-* личественного определения человеческого пролактина. Из приведенных на рис. 2.1 характеристик этого аналитического метода следует, что получаемые с его помощью результаты целиком зависят от природы метки. В дальнейшем была получена специфическая антисыворотка по отношению к человеческому пролактину, и в настоящее время все компоненты, необходимые для его анализа (метка, антитела и стандарт), до-ступны в высокоочищенном виде,
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed