Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Микроскопическое исследование при дерматомикозах: из пораженных волос,
кожных чешуек приготовить препарат для микроскопии и поставить
микроскопический диагноз заболевания трихофитии, микроспории, фавуса или
эпидермофитии.
2. Определить видовую принадлежность дрожжеподобного гриба рода Candida
на основании морфологии клеток и колоний, типа филаментации и
биохимических свойств.
Методические указания
Микроскопическое исследование. Для приготовления препарата на предметное
стекло наносят каплю 10% едкой щелочи или спирта с глицерином, в которую
помещают 2-3 подозрительных волоса или несколько кожных чешуек, или
беловатые влажные налеты со слизистых оболочек. Препарат (со щелочью)
252
'i
l
Рис. 89. Дерматофиты в пораженном волосе. I - Microsporon; 2 -
Trichophyton; 3 - Achorion.
осторожно подогревают над пламенем до появления белого ободка из
кристаллов щелочи по периферии капли, не доводя ее до кипения. Затем
каплю накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом с
объективом 8 и 40.
При фавусе в волосе обнаруживают полиморфные грибковые элементы. Наряду с
тонким мицелием встречается мицелий широкий, состоящий из прямоугольных
клеток. Часто наблюдаются споры круглой или прямоугольной формы, а также
пузырьки воздуха (рис. 89).
При трихофитии локализация элементов гриба в патологическом материале
может быть различной. Споры гриба Trichophyton либо располагаются только
внутри пораженного волоса, сплошь заполняя его содержимое (эндотрикс),
либо
253
несколькими слоями окружают волос снаружи в виде чехла (эктотрикс), либо
споры и мицелий находятся как внутри, так и снаружи волоса
(эндоэктотрикс).
При микроспории волос в фолликулярной части окружен "чехлом" из мозаично
расположенных мелких спор гриба. Внутри волоса обнаруживаются фрагменты
гриба и споры.
При эпидермофитии элементы гриба содержатся в чешуйках кожи, где
располагаются в виде толстых септирован-ных ветвящихся нитей мицелия
наряду со спорами многогранной формы.
При кандидозах в патологическом материале видны одноклеточные
грамположительные микроорганизмы круглой и овальной формы, не образующие
истинных спор и истинного мицелия. Грибы рода Candida формируют
псевдомицелий, который отличается от истинного отсутствием общей оболочки
и перегородок и состоит из длинных тонких клеток, соприкасающихся друг с
другом узким основанием. Для установления диагноза кандидоза необходимы
многократные количественные Высевы патологического материала на агаровую
среду в чашки Петри. Нарастающее количество колоний, обнаруженных в
посевах, а также антител в сыворотке крови подтверждает диагноз.
Культуральное исследованне. Проводится для установления родовой и видовой
принадлежности возбудителя путем выделения чистой культуры гриба и
изучения его биологических свойств. Материал предварительно обрабатывают
кислотами или антибиотиками. Затем делают посев на сахарный питательный
агар, сусло-агар (готовится из неохмеленного пивного сусла), агар Сабуро
(пептонная вода с мальтозой и агаром), овощные среды (морковный агар),
куда добавляют антибиотики для задержки роста бактериальной флоры. Посевы
инкубируют при 30°С. В положительных случаях рост наблюдается на 3-5-е
сутки в виде разнообразных колоний; гладких, морщинистых, мучнистых,
пушистых, часто пигментированных. При микроскопии препаратов,
приготовленных из культур, хорошо заметен развитой, широко ветвящийся
септированный мицелий. Органами размножения служат споры, которые могут
быть как внутренними (эндоспоры), расположенными внутри мицелия, так и
наружными (экзоспоры), расположенными на концах или по сторонам нитей
мицелия. Специальных органов плодоношения типа асков (сумок) у
дерматофитов не обнаружено, что дало основание отнести их к несовершенным
грибам-Fungi imper-fecti.
Грибы рода Candida на 2-3-й день после посева образуют мелкие выпуклые
колонии, которые нередко сливаются в мощные образования, врастающие в
среду. Идентификацию грибов
254
Рис. 90. Типы роста (филаментации) дрожжеподобных грибов рода Candida. 1
~ mycotorula; 2 - mycotoruloides; 3 - Candida; 4 - mycocandida.
рода Candida проводят на основании данных микроскопии патологического
материала, культуральных признаков, биохимической активности, типов роста
- филаментации (рис. 90) и патогенности, которую определяют при заражении
лабораторных животных.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА
ГЛУБОКИХ (СИСТЕМНЫХ) МИКОЗОВ
Возбудителями глубоких микозов являются грибы; Cryptococcus neoformans,
вызывающие криптококкоз. Histoplasma capsulatum - гистоплазмоз.
Coccidioides immitis - кокцидиоидоз, Blastomyces dermatitidis -
бластомикоз и др. Микробиологическая диагностика проводится путем
микроскопического исследования, при котором выявляются характерные
морфологические особенности возбудителя, и путем микологического
исследования, т. е. выделения чистой культуры гриба.
Диагностические, профилактические и лечебные
