Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Борисов Л.Б. -> "Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии" -> 88

Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.

Борисов Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии — М.: Медицина, 1984. — 256 c.
Скачать (прямая ссылка): rukovodstvoklabzadaniyampomikroekonomiki1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 82 83 84 85 86 87 < 88 > 89 90 91 92 93 94 .. 96 >> Следующая

характерные цитопатические изменения, существенно отличающиеся от тех,
которые вызываются другими вирусами: своеобразная группировка
дегенерированных клеток в виде гроздьев на периферии клеточного пласта и
быстрое отслоение пораженных клеток от поверхности стекла. В культурах
фибробластов цитопатические изменения развиваются медленнее и
характеризуются резким набуханием клеток с распадом ядра. Для
аденовирусной инфекции эпителиальных клеток и фибробластов характерно
образование внутриядерных включений.
Экспресс-диагностика (схема 23). Иммунофлюоресцентный
233
метод Кунса является наиболее специфичным, универсальным в отношении
разных видов возбудителей. Определение вирусных антигенов с помощью
флюоресцентных антител проводится прямым и непрямым способами.
Материалом для исследования служат смывы из зева и носоглотки больных, а
также зараженные смывами клеточные культуры. Для приготовления препаратов
смыв центрифугируют при 2000-3000 оборотов в течение 10 мин. Из осадка
готовят нативные мазки на нескольких обезжиренных предметных стеклах для
обработки различными флюоресцирующими сыворотками: против вирусов гриппа
Al, А2 и В, против вирусов парагриппа II и III типов, против
респираторно-синцитиального вируса, поливалентной противоаденовирусной
сывороткой.
При микроскопии препаратов обращают внимание на светящиеся вирусные
частицы, располагающиеся внутри клеток: аденовирусы - в ядре, вирусы
гриппа и парагриппа -в цитоплазме в виде круглых или овальных мелких
образований. Число светящихся вирусных частиц может быть различным - от
единичных до больших скоплений.
Вирусологическое исследование. Носоглоточные смывы обрабатывают смесью
антибиотиков (пенициллина и стрептомицина по 1000 ЕД/мл) и
центрифугируют. Надосадочной жидкостью производят заражение куриного
эмбриона (для вируса гриппа), клеточных культур перевиваемых клеток почек
обезьян МК-2 (для вирусов гриппа и парагриппа) и клеток НЕР-2 (для
аденовирусов).
Для приготовления препаратов в пробирки, предназначенные для клеточных
культур, предварительно помещают половинки покровных стекол. Через 24 ч
после заражения при первых признаках ЦПД вирусов покровные стекла
извлекают и обрабатывают различными флюоресцирующими антисыворотками.
Метод флюоресцирующих антител дает возможность выявить респираторные
вирусы в зараженных клеточных культурах в более ранние сроки, чем их
индикация по ЦПД или по гемадсорбции, и при весьма малой инфицирующей
дозе. С помощью иммунофлюоресцентного метода проводится не только
индикация, но и идентификация вирусов парагриппа, РСВ, аденовирусов и
микоплазм в зараженных клеточных культурах. Кроме того, после накопления
в клеточных культурах можно идентифицировать аденовирусы - в РСК, вирусы
парагриппа-в РТГА, РСК и в реакции нейтрализации со специфическими
антисыворотками.
Для выделения, пассирования и титрования вирусов гриппа их культивируют в
развивающихся куриных эмбрионах.
Наличие вируса гриппа в амниотической или аллантоисной
234
Рис. 85. Постановка реакции торможения гемагглютинации.
жидкости определяется ориентировочно с помощью РГА. Вирусы гриппа А
хорошо агглютинируют эритроциты курицы, морской свинки, человека с
группой крови I (0); вирусы гриппа В - эритроциты курицы.
Для титрования вируса в реакции гемагглютинации берут 1% взвесь
эритроцитов. Титром вируса считается то наибольшее разведение, при
котором наблюдается агглютинация эритроцитов не менее чем на ++ (1 АЕ -
одна агглютинирующая единица).
Штаммы вируса гриппа, выделенные от больных во время эпидемических
вспышек или в межэпидемические периоды, подлежат изучению с целью
определения их серологического типа. Типирование вируса проводят в РТГА с
набором типоспецифических сывороток. Результаты реакции учитывают по
отсутствию гемагглютинации. Тип вируса (А, В или С) дифференцируют в РСК.
Подтипы вируса А с антигенами H0N1, HlNl, H2N2, H3N2 и др. могут быть
дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических
сывороток (табл. 50 и 51).
Для идентификации Н- и N-антигенов используют моно-рецепторные сыворотки,
полученные отдельно к гемагглюти-нину и нейраминидазе. При этом
идентификация Н-антигена проводится в РТГА или с помощью реакции
иммунопреципитации в геле, а N-антигена - в реакции ингибиции нейрамини-
дазы и реакции нммунопреципитацйи в геле.
235
Таблица 50. Постановка РТГА для тонирования вируса гриппа
N* пробирки
Ингредиенты, мл опытные контрольные
1 2 3 4 ... 1 сыво- ротки 2 БИРУ- ' са 3 эритро-
цитов
Разведение типоспецифической сыворотки Вирус (4-гемагглю-тинируюшие 1 :10
0,2 1 :20 0,2 1 :40 0,2 1 :80 и т. д. 0,2 до титра 0,2 - -
дозы) Изотонический раствор хлорида 0,2 0,2 0,2 0,2 ...
0,2
натрия ... 0,2 0,2 0,2
Экспозиция 60 мин при комнатной температуре
1% суспензия
эритроцитов
курицы 0,4 0,4 0,4 0,4 ... 0,4 0,4 0,4
Экспозиция 30-60 мин при комнатной температуре
Результаты
Таблица 51. Результаты РТГА при тонировании вируса гриппа.
Предыдущая << 1 .. 82 83 84 85 86 87 < 88 > 89 90 91 92 93 94 .. 96 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed