Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
зависят от периода заболевания.
Бактериоскопическое исследование. Проводят при первичном сифилисе во
время появления твердого шанкра. Материалом для исследования служат
отделяемое шанкра, содержимое регионарных лимфатических узлов, из
которого готовят препарат "раздавленная" капля и исследуют в темном поле.
В положительном случае видны тонкие извитые нити длиной 6-14 мкм, имеющие
10-12 равномерных мелких завитков правильной
224
/
| Рис. 84. Treponema pallidum в
f темном поле зрения.
формы (рис. 84). Для бледной трепонемы характерны маятникообразные и
поступательно - сгибательные движения. При локализации твердого шанкра в
полости -рта приходится дифференцировать бледную трепо-нему от
сапрофитных трепонем, являющихся представителями нормальной микрофлоры
организма. В этом случае решающее диагностическое значение имеет
обнаружение типичных трепонем в пунктате регионарных лимфатических узлов.
Серодиагностика. Наиболее доступна и применяется как основной метод
диагностики сифилиса во всех периодах заболевания. Ставятся РСК, реакция
Вассермана, осадочные реакции Кана и Закса-Витебского (цитохолевая),
реакция иммобилизации трепонем и реакция непрямой иммунофлюоресценции.
Реакцию Вассермана ставят одновременно с тремя антигенами: 1)
специфическим, содержащим антигены возбудителя - разрушенные ультразвуком
трепонемы, 2) неспецифическим - кардиолипиновым (экстракт бычьего сердца
с лецитином и холестерином); 3) неспецифическим - спиртовым экстрактом
липоидов из мышцы сердца быка с холестерином. Исследуемую сыворотку
разводят 1 :4 и разливают в 4 пробирки по 0,1 мл. В табл. 46 показана
схема постановки этой реакции.
Первый период сифилиса является серонегативным и характеризуется
отрицательной реакцией Вассермана. У 50% больных реакция становится
положительной не ранее чем через 2-3 йед после появления твердого шанкра.
Во втором и третьем периодах сифилиса частота положительных реакций
достигает 75-90%. После проведенного курса лечения реакция Вассермана
становится отрицательной.
Для диагностики поздних и латентных форм сифилиса можно использовать
реакцию Вассермана с ликвором, применив те же антигены, что и для реакции
с сывороткой больного.
Параллельно реакции Вассермана ставятся две осадочные реакции: Кана и
Закса-Витебского (цитохолевая). Для их постановки используют сыворотку
больного и соответствующие антигены (табл. 47 и 48).
9-639
225
Непрямая реакция иммуноф люоресценции наиболее специфична. Антигеном
является взвесь тканевых трепонем. Сыворотку больного инактивируют так
же, как для реакции Вассермана, и разводят 1:200. На предметные стекла
наносят капли антигена, высушивают и фиксируют 5 мин в ацетоне. Затем на
препарат наносят сыворотку больного, через 30 мин промывают и высушивают.
Следующим этапом является
Таблица 46. Постановка реакции Вассермана
№ пробирки
1 2 3 4 (контроль)
Инактивированная испытуемая сы-
воротка 0.1 0,1 0,1 0,1-
Изотонический раствор хлорида натрия 0,4 0,4 0,4 0,9
Антиген № 1, разведенный по титру 0,5 - - -
Антиген N" 2, разведенный по титру - 0,5 - -
Антиген № 3, разведенный по титру - - 0,5 -
Комплемент (в рабочей дозе) 0,5 0,5 0,5 0,5
В термостат на 45 мин
Гемолитическая система (сенсибилизированная) 1,0 1,0 1,0 1,0
В термостат на 40-60 мин в зависимости от наступления гемолиза в контроле
Регистрация результатов реакции после наступления гемолиза в контроле
Результат -Н-+ +++ +++
Условные обозначения: +-Н- полная задержка гемолиза; - гемолиз.
обработка препарата флюоресцирующей сывороткой против глобулинов
человека. Изучают препарат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая
степень свечения трепонем.
Реакция иммобилизации трепонем является специфической реакцией для
диагностики сифилиса. Принцип реакции заключается в угнетении движения
бледных трепонем (иммобилизация) антителами сыворотки крови в присутствии
комплемента. Трепонемы получают из яичка кролика, зараженного
экспериментальным сифилисом. Яичко измельчают в специальной среде, в
которой трепонемы сохраняют подвижность. Ставят реакцию следующим
образом; взвесь тканевых
226
Таблица 47. Постааоика реакции Кана
Ингредиенты, мл Ns пробирки
1 2 3 4 5 б
Антиген Испытуемая сыворотка Изотонический раствор хлорида натрия 0,05
0,15 0,025 0,15 0,0125 0,15 0,05 0,15 0,025 0,15 0,0125 0,15
Тщательно встряхивать в теч ение 3 м ин
Изотонический раствор хлорида натрия 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Встряхивать 1 мин
Результаты при положительной реакции +++ +++ +++ _ - -
Условные обозн дение хлопьев; - отсутствие а ч е н и хлопьев я:
+++ появлен ие прицг шитата и выпа-
(подвижных) трепонем соединяют в пробирке с исследуемой сывороткой и
добавляют свежий комплемент. В одну контрольную пробирку вместо
исследуемой сыворотки наливают сыворотку здорового человека, в другую -
вместо свежего комплемента добавляют инактивированный, неактивный. После
выдерживания при 35°С в анаэробных условиях (анаэростат) из всех пробирок
