Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
лактоза, сахароза, мочевина, некоторые соли и индикатор - феноловый
красный).
На 3-й день отмечают ферментацию глюкозы на среде Ресселя и ставят
ориентировочную реакцию агглютинации на стекле. На основании полученных
данных дают второй предварительный ответ.
Для дальнейшего исследования отбирают несколько бесцветных колоний со
среды Эндо и пересевают их в среду Ресселя или скошенный питательный агар
(для контроля полученных результатов). Чистую культуру, выросшую на среде
Ресселя или скошенном питательном агаре, пересевают на среды "пестрого"
ряда и используют для постановки реакции агглютинации на стекле со смесью
групповых сывороток, а затем с адсорбированными монорецепторными О- и Н-
сальмонеллезными сыворотками. Окончательный диагноз устанавливают на
основании данных "пестрого" ряда (табл. 36) и реакции агглютинации.
По способности разлагать ксилозу и арабинозу культуры бактерий брюшного
тифа могут быть разделены на три ферментативных типа (биовара): 1)
ксилозоположительные, арабинозо-отрицательные; 2) ксилозоотрицательные,
арабинозоотрицатель-ные; 3) ксилозоположительные, арабинозоположительные.
Определение ксилозоарабинозного признака может быть использовано для
маркировки бактерий в эпидемиологических целях.
Фаготипирование. С помощью набора стандартных Vi-фагов определяют до 78
фаготипов S. typhi. При этом необходимым условием является наличие в
культуре Vi-антигена. Культуры
184
S. schottmuelleri дифференцируются на 11 фаготипов и подтипов.
Получение копрокультуры. Испражнения засевают на одну из дифференциально-
диагностических сред (Эндо или Левина). Для посева петлю кала вносят в
пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию.
После оседания крупных комочков петлю тонкой суспензии наносят на
поверхность агаровой среды - на одну половину чашки. Материал тщательно
растирают шпателем по одной, а затем по другой половине чашки для
получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-
20 ч. Одновременно испражнения засевают на среду обогащения Мюллера или
селенитовую среду. На этих средах удается получить рост возбудителя даже
в том случае, когда он содержится в исследуемом материале в
незначительном количестве. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-20 ч.
Состав среды Мюллера: 4,5 г х. ч. мела, 90 мл питательного бульона, 2 мл
раствора Люголя и Ю мл 50% раствора гипосульфита натрия. Среду разливают
по 8-10 мл в пробирки. При взаимодействии йода и гипосульфита образуется
тетратионат натрия, подавляющий рост кишечной палочки, но не
препятствующий росту сальмонелл.
Селенитовая среда готовиться из основного раствора, который содержит 0,5%
пептона, 0,7% фосфата натрия однозамещенного, 0,3% фосфата натрия
двузамещенного, 0,4% лактозы в дистиллированной воде. К 50 мл стерильной
основной среды добавляют ex tempore 2 мл 10% раствора кислого
селенистокислого натрия и разливают приготовленную среду по 5-7 мл в
пробирки. Селенистокислый натрий стимулирует рост сальмонелл и подавляет
сопутствующую флору.
Таблица 36. Бнохнмическне свойства тнфо-пяратнфозных бактерий
Вид бактерии Ферментация Образование
Действие на лакмусовое молоко
Лак-( тозы глю- козы маль- тозы саха- розы ман- нита HaS NH3
индо- ла
S. typhi - К К - К + - - Кислая реакция
S. paratyphi А - КГ КГ - КГ - - - То же
S. schottmuelleri кг кг кг + +
Щелочная реакция
Условные обозначения те же, что и в табл. 35.
На 2-й день изучают характер колоний, выросших на чашках (см. рис. 73),
пересевают 2-3 бесцветные колонии на среду Ресселя и в пробирки со
скошенным питательным агаром. При отсутствии подозрительных колоний на
чашках делают
185
высевы из среды Мюллера или селенитовой среды на чашки со средой Эндо для
получения изолированных колоний тифозных или паратифозных бактерий. Для
ускорения ответа ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с
материалом, взятым из бесцветной колонии. Далее поступают так же, как и
при идентификации гемокультуры.
Серодиагностика. В лабораторной практике широко применяется реакция
агглютинации Видаля, основанная на обнаружении в сыворотке крови людей
агглютининов, которые появляются в конце 1-й -начале 2-й недели
заболевания, и на изучении динамики нарастания и длительности сохранения
антител. Реакция ставится одновременно с 4 антигенами: О- и Н-брюш-
нотифозными, А- и В-паратифозными диагностикумами. Брюшнотифозные
монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни, так как
содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела
накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-
антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в
течение длительного времени.
У людей, вакцинированных против брюшного тифа и пара-тифов, также
наблюдается положительная реакция Видаля, причем в довольно высоком
титре, поэтому "инфекционный Видаль" удается отличить от "прививочного"
только по нарастанию титра агглютининов у больных в процессе заболевания.
